内容正文:
重组DNA技术的基本工具
基因工程
一、DNA基本结构
磷酸
脱氧核糖
含氮碱基
A(腺嘌呤)
G(鸟嘌呤)
C(胞嘧啶 )
T(胸腺嘧啶)
1’
2’
3’
4’
含N碱基
脱氧
核糖
磷酸
5’
模型建构1:
组成DNA的基本单位是脱氧核苷酸,其化学组成包括磷酸、碱基和脱氧核糖
二、DNA双螺旋结构的主要特点
G
A
G
G
C
C
C
T
A
T
C
C
T
G
G
A
G
O
CH2
OH
H
碱基
3′
2′
H
H
1′
4′
5′
H
H
磷酸基团
5'
3'
5'
3'
DNA的一条单链具有两个末端,一端有一个游离的磷酸基团,称作5'-端,另一端有一个羟基(—OH),称作3'-端,两条单链走向相反,一条单链从5′-端到3'-端,另一条单链从3'-端到5'-端。
DNA的两条单链按反向平行方式盘旋成双螺旋结构。
DNA中的脱氧核糖和磷酸交替连接,排列在外侧,构成基本骨架;碱基排列在内侧。
两条链上的碱基通过氢键连接成碱基对:A与T配对(3个);G与C配对(2个)。
三、对基因工程概念的理解
概念:是指按照人们的愿望,通过转基因等技术,赋予生物新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的,因此又叫做重组DNA技术。
1.操作环境:体外
2.操作水平:DNA分子水平 操作对象:基因
3.目的:产生符合人们需要的新的生物类型和生物产品
4.原理:基因重组
5.其他名称:重组DNA技术、 转基因技术
6.基因工程最大的优势:定向改造生物的遗传性状
结合必修二思考:
①基因重组只发生在有性生殖过程中吗?
②基因拼接的原理:
③目的基因在受体细胞中表达的原理:
①DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸②DNA分子都遵循碱基互补配对原则
③双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构
①基因是控制生物性状的遗传物质的结构和功能单位。
②遗传信息的传递都遵循中心法则。
③生物界共用一套遗传密码(相同的遗传信息在不同的生物体内表达出相同的蛋白质)。
肺炎双球菌的转化、基因工程
肺炎链球菌的转化实验,不仅证明了遗传物质是DNA,还证明了DNA可以在同种生物个体间转移。
DNA双螺旋结构模型,DNA的半保留复制,中心法则,
遗传密码破译
体外进行了DNA的改造,成功构建了第一个体外重组DNA分子。
DNA序列分析
DNA合成仪
农杆菌转化法
发明PCR,为获取目的基因提供了有效手段。
细菌质粒有自我复制能力,并可以在细菌细胞间转移。
限制酶、DNA连接酶和逆转录酶被相继发现。这些发现为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。
质粒可以作为基因工程的载体,构建重组DNA,导入受体细胞,使外源基因在原核细胞中成功表达,并实现了物种间的基因交流。
高通量测序技术
基因组编辑技术,实现对特定基因的定点插入、敲除或替换
四、基础理论和技术的发展催生了基因工程
第1节 重组DNA技术的基本工具
1.工具:限制酶、DNA连接酶、载体
2.工具酶:限制酶、DNA连接酶
一、分子手术刀——限制酶(限制性内切核酸酶)
1.主要来源:原核生物
a.限制酶在原核生物中的作用是什么?
b.限制酶不破坏自身DNA的原因是什么?
2.作用特点(特异性):识别双链DNA分子的特定核苷酸序列,
并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。
3.识别序列:大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成,也有少数限制酶的识别序列由4个、8个或其他数量的核苷酸组成。
4.作用的化学键:磷酸二酯键
原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵,所以它在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制。限制酶就是它的一种防御性工具。当外源DNA入侵时,它会利用限制酶来切割外源DNA,使之失效,以保证自身安全。
所以,简单来说:限制酶在原核生物中起到的作用为:切割外源DNA、使之失效,以保证自身安全
DNA分子中不具备这种限制酶的识别切割序列,或者DNA分子被修饰(甲基化),使限制酶不能将其切开
①无论是6个碱基还是4个碱基,都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的 ,这就是回文序列。
②能被限制酶特异性识别的切割部位基本都具有回文序列:在切割部位,一条链正向读的碱基顺序与另一条链反向读的顺序完全一致。
7
思考
仔细观察以下四种限制酶识别的特定序列有何特点?
EcoRⅠ
……G-A-A-T-T-C……
……C-T-T-A-A-G……
HindⅢ
……A-A-