2024届高三生物二轮复习课件基因工程 修改

勇于开始， 才能找到成功的路 工具（限制酶、DNA连接酶、载体 ） 基因工程的工具酶：限制酶、DNA连接酶 1.限制酶： （1）主要来源：原核生物 a.限制酶在原核生物的作用是？切割外源DNA，从而达到保护自身的目的。 b.限制酶不破坏自身DNA的原因是什么？①细胞自身的DNA分子没有该限制酶的识别序列 ②甲基化酶对细胞自身具有的识别序列进行了修饰 （2）作用特点：专一识别特定的核苷酸序列，切割特定部位 （3）结果：产生黏性末端或平末端 （4）作用的化学键：磷酸二酯键 2.DNA连接酶：E.coliDNA连接酶只连接黏性末端；T4DNA连接酶连黏性末端和平末端 3.载体： 质粒（最常用）、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒 ①质粒结构：一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子②质粒作用：作为运载工具，将目的基因送到宿主细胞中去、利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制 ③作为载体必须具备的四个条件？ 落实整理：基因工程工具——7分钟背熟 1、选目的基因两端和运载体都有的酶切位点； 2、所选酶切位点不能破坏目的基因以及标记基因 3、为避免目的基因和质粒的自身环化及目的基因与质粒的随意连接(反向连接)，可使用两种切割后能产生不同黏性末端的限制酶来切割目的基因和质粒，确保目的基因和质粒正向连接 4规律：---选择酶切位点的原则： 1. 基因工程的四个步骤 P76页第一段。2. 目的基因的筛选和获取：①目的基因的定义和类型----P76， 筛选目的基因的有效的方法？--P76最后一段； 通过什么工具进行筛选？P77第二自然段 获取目的基因的方法---P77第三段: 人工合成、PCR扩增、构建基因文库----P82 ②PCR的名称，定义，原理，5个基本条件、扩增的仪器,DNA聚合酶的激活条件？引物的种类？引物的定义？---P77相关信息。 ③扩增的过程P77及78页文字和图； DNA子链的延伸方式是从___端到___端，脱氧核苷酸添加到引物的___端？ ④PCR完成后如何检测和鉴定PCR的产物？P78页最后自然段 ⑤用PCR可以扩增mRNA吗？P79旁栏思考；需要在体系中加入的酶？ 3. 基因表达载体的构建： ①基因工程的核心步骤是？该步骤的作用是？--P80 ②基因表达载体的组成部分？每一部分的作用？启动子的类型？特性？ ③构建基因表达载体的过程？--P80页和图 同种限制酶或是能产生相同末端的限制酶切割基因表达载体和含目的基因的DNA片段，DNA连接酶连接。 4. 将目的基因导入受体细胞①导入植物细胞的方法有？P80-81花粉管通道法：P81农杆菌转化法： 导入动物细胞的方法有？P82 受体细胞一般为受精卵，全能性高---显微注射法 导入微生物细胞的方法有？P82---Ca2+处理大肠杆菌细胞……②转化的定义--P81页资料卡，③农杆菌转化法：T-DNA的定义和特点？农杆菌转化法的过程 5. 目的基因的检测与鉴定 ①分子水平的检测--如何检测染色体DNA上是否插入外源基因？②如何检测是否转录出了mRNA？ ③如何检测是否翻译成了蛋白质？④个体水平如何检测？--P82 性状测定、抗性检测 6.基因工程的应用：获得乳腺生物反应器生产药物的过程？--P90 基因工程菌的定义---P91相关信息 7.蛋白质工程的定义---P93 基础是？通过什么手段？目的是？ 基因工程只能生产出自然界已有的蛋白质,蛋白质工程对目的基因进行实质性的改造，从而改造现有蛋白质或制造新的蛋白质 蛋白质工程的基本思路---P94 第三段和图。 PCR获取和扩增目的基因P77 名称：聚合酶链式反应 原理：DNA半保留复制 仪器：P84 PCR仪 特点：体外，大量复制目的基因 条件：P77表3-1补充勾画 模板：DNA母链 原料：4种脱氧核苷酸 实际上是4种dNTP 酶：耐高温的DNA聚合酶（P16筛选；P84 TaqDNA聚合酶） 引物：P77相关信息 一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸，通常为20-30个核苷酸，需2种引物。 缓冲液（含Mg2+）:P77相关信息 真核细胞和细菌的DNA聚合酶需要Mg2+激活。 变性（90℃以上）高温目的基因DNA受热变性，打开氢键解为单链 复性（50℃左右）引物与单链相应互补序列结合 延伸（72℃左右）以单链DNA为模板，在DNA聚合酶作用下延伸，即将4种脱氧核苷酸加到引物的3’端