2024届高三一轮复习课件：基因工程的应用及蛋白质工程

本节看点 1. 认知PCR技术的基本流程 2. 理解引物位置对最终扩增序列的影响 3. 理解各类型PCR的操作与意义 01.PCR技术 02.应用与拓展 PCR技术 PCR技术路线包括： 高温变性解旋 (92℃左右， 与GC占比有关) 低温退火复性 (55℃左右， 与GC占比有关) 新链延伸 (72℃左右) PCR技术体系中含有： 模板DNA分子 dNTP/四种游离的脱氧核糖核苷酸 (提供原料及能量) Taq DNA聚合酶(耐高温) 两种引物(创造复制起始端) 缓冲液(平衡pH) PCR技术 PCR技术路线包括： 高温变性解旋 (92℃左右，与GC占比有关) 低温退火复性 (55℃左右，与GC占比有关) 新链延伸 (72℃左右) PCR技术体系中含有： 模板DNA分子 四种游离的脱氧核糖核苷酸/dNTP (提供原料及能量) Taq DNA聚合酶(耐高温) 两种引物(创造复制起始端) 缓冲液(平衡pH) Taq酶耐高温 细胞内DNA复制： 以DNA两条单链为模板( ) 以游离的脱氧核糖核苷酸为原料（V） 在 解旋酶（X） 和 DNA聚合酶（X） 作用下 如何把已有的一个DNA分子中特定位置片段的数目变多 高温解旋 引物（可以自行设计V ） 从5‘向3‘延伸形成新单链 低温恢复 思考 PCR技术——第一轮 PCR技术路线包括： 高温变性解旋 (92℃左右，与GC占比有关) 低温退火复性 (55℃左右，与GC占比有关) 新链延伸 (72℃左右) PCR技术体系中含有： 模板DNA分子 四种游离的脱氧核糖核苷酸/dNTP (提供原料及能量) Taq DNA聚合酶(耐高温) 两种引物(创造复制起始端) 缓冲液(平衡pH) 5'末端 3'末端 dNTP ∞ Taq DNA聚合酶 3'末端 5'末端 引物∞ 反应体系 3'末端 5'末端 5'末端 3'末端 1.高温解旋 3' 5' 5' 3' 5'末端 3'末端 3'末端 5'末端 2.低温退火 3'末端 5' Taq DNA聚合酶作用下 3'末端 5'末端 5'末端 3'末端 5' 3'末端 3.新链延伸 PCR技术——第二轮 PCR技术路线包括： 高温变性解旋 (92℃左右，与GC占比有关) 低温退火复性 (55℃左右，与GC占比有关) 新链延伸 (72℃左右) PCR技术体系中含有： 模板DNA分子 四种游离的脱氧核糖核苷酸/dNTP (提供原料及能量) Taq DNA聚合酶(耐高温) 两种引物(创造复制起始端) 缓冲液(平衡pH) 1.高温解旋 2.低温退火 3.新链延伸 PCR技术——第三轮 PCR技术路线包括： 高温变性解旋 (92℃左右，与GC占比有关) 低温退火复性 (55℃左右，与GC占比有关) 新链延伸 (72℃左右) PCR技术体系中含有： 模板DNA分子 四种游离的脱氧核糖核苷酸/dNTP (提供原料及能量) Taq DNA聚合酶(耐高温) 两种引物(创造复制起始端) 缓冲液(平衡pH) 1.高温解旋 2.低温退火 3.新链延伸 注意： PCR第三轮结束后，目的基因(双链)真正出现 习题精练 图1是科研工作者利用差异杂交法获取相关目的基因的研究；图2是克隆出的花色基因C， 和实验所用质粒表达载体简图（箭头所指分别为限制性核酸内切酶EcoRI 、BamlI的酶切位点， ampR为青霉素抗性基因， tetR为 四环素抗性基因， P为启动子， T为终止子， ori为复制原点），拟将其与质粒重组，再借助农杆菌导入菊花中。请据图回答问题： （1）图 1中， A过程需要用 酶， D过程需要筛选 （填“未杂交”或“杂交分子”）的含 32 P的cDNA单链，继而通过人工合成，获得双链cDNA， 并用其构建基因文库。 习题精练 （2）图2中菊花组织培养的培养基常用 方法灭菌。菊花的组织培养过程③需添加生长素和细胞分裂素，当其比值 （升高/降低/适中）促进生根。 （3）图3表示运用影印培养法（使一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法）检测基因表达载体是否导入了农杆菌。培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有 、 。从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是 （填数字）菌落中的细菌。 习题精练 （4）为确定基因C是否整合到菊花染色体的DNA上，可用放射性同位素标记的 作为探针进行分子检测，还需要在个体水平上通