内容正文:
本节看点
1. 真原核生物基因结构的差异
2. DNA聚合酶与DNA连接酶的区别与联系
3. 理解同尾酶定义及应用
01.原理与工具
02.基因工程的过程
原核生物的基因
基因 非基因
基因通常是具有遗传效应的DNA片段
翻译
转录
mRNA
基因2
基因3
基因4
基因1
非编码区
编码区
放大
基因3
原核生物DNA
收 裁剪&拼接
翻译 收
mRNA
真核生物DNA
基因1 基因2 基因3 基因4
基因 非基因
收
收
转录
hnRNA
放大
编码区
非编码区
基因3
内含子1 外显子1 内含子2 外显子2 内含子3 外显子3 内含子4
内含子 外显子
基因3编码区
放大
真核生物的核基因
非编码区的结构
启动子: 编码区上游能与RNA聚合酶结合并形成转录起始复合体的区域
终止子: 位于编码区下游,转录过程中能够终止 RNA聚合酶转录的DNA序列,使RNA合成终止
调控序列:对基因表达起调控作用的序列的统称
编码区
非编码区
调节基因
操纵基因
终止子
启动子
DNA基本结构
3'末端
T
T
C
G
A
A
5'末端
A
A
G
C
T
T
4 1
5
3 2
5'末端
3'末端
5'末端
3'末端
G
C
A
T
A
T
限制性核酸内切酶——黏性末端
5' … A 3' A5'
3' … T T C G A 5'
黏性末端
A A G C T T
T T C G A A
3'
A G C T T
A
… 3'
… 5'
… 3'
… 5'
5' …
3' …
Hind III
5'末端
A
A
G
C
T
T 3'末端
T
T
C
G
A
A
3'末端
5'末端
限制性核酸内切酶——平末端
5'末端
G
A
T
A
T
C 3'末端
C
T
A
T
A
G
5' …
3' … G A T A T C
C T A T A G
EcoR V … 3'
… 5'
3'
5' 平末端 5'
3' … 3'
… 5'
A T C
T A G
G A T
C T A
5' …
3' …
3'末端
5'末端
限制性核酸内切酶
限制(性核酸内切)酶
作用实质 断开(水解)磷酸二酯键
作用于 双链
作用结果 形成黏性末端或平末端
获取目的基因
特点 识别特定序列
(回文序列)
来源 原核生物(主要)
举例 EcoR I 、Alu l
Sam I 、BamH I 等
DNA连接酶
5' … G A T A T C … 3'
3' … C T A T A G … 5'
T4 DNA连接酶
5' … A A G C T T … 3'
3' … T T C G A A … 5'
T4 DNA连接酶
E.coli DNA连接酶
…
… 3'
5' 平末端 5'
3' … 3'
… 5'
3'
A G C T T
3' A
… A
… T T C G A
A T C
T A G
G A T
C T A
A5'
5'
黏性末端
… 3'
… 5'
A
DNA连接酶
DNA连接酶
作用实质 形成磷酸二酯键
作用于 双链
作用结果 连接已有DNA片段
形成重组DNA
举例 T4 DNA连接酶
(黏性末端&平末端)
E.coliDNA连接酶
(黏性末端)
注意:
DNA聚合酶与DNA连接酶并非同一种酶