2023届高三生物三轮复习基因工程回扣

五、生物技术与工程 一、目标引领 1.全面把握现代生物技术的体系,掌握基本技术的基本原理、步骤,能够实施具体操作 2.图文结合,能够精准判断生物技术手段的综合运用及每个环节应该注意事项 3.整体把握现代生物技术在工业、农业、环保、医药等生产中的具体应用,并解决实际问题 二、回扣试题分布 试题 试题 问题反思及应对策略 一模 13/14/20/25 二模 14/15/20/25 三模 13/14/20/25 三轮一 12/13/14/20/25 三轮二 12/13/14/20/25 三轮三 13/14/20/25 三轮四 12/13/14/20/25 三轮五 9/12/14/15/25 期末 20/25 三、核心考点归纳: 一、如何选择限制酶 1:根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类 ①应选择切点位于目的基因两端的限制酶,如图甲可选择Pst ,缺点:目的基因和载体可发生自身环化和反向连接。 ②可选择用Pst 和EcoR 两种限制酶,既保证目的基因和载体的定向连接,又避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接。(注意描述主语) ③不能选择Sma ,原因是会破坏甲中的目的基因,破坏乙种的标记基因。 2:根据质粒的特点确定限制酶的种类 ①所选限制酶要与切割目的基因的限制酶相一致,以确保具有相同的黏性末端。 ②质粒作为载体必须具备标记基因等,所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构,至少保留一个标记基因;如果所选酶的切点不止一个,则切割重组后可能会丢失某些片段,若丢失的片段含复制起点区,则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。 例1:现有3种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点:Msp (C CGG)、EcoR (G AATTC)、BamH (G GATCC)、Sau3A ( GATC)、Sma (CCC GGG)。请回答下列问题: 1.若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行,形成重组质粒,那么应选用的限制酶的识别序列是_。在导入重组质粒后,为了筛选出含质粒的大肠杆菌,一般需要用添加_的培养基进行培养,想进一步筛选出含重组质粒的受体细胞,还需要接种到含_的培养基中培养。不选用Sau3A的原因:_。 2.假设用BamH 切割DNA获取目的基因,用Mbo 切割质粒,然后形成重组质粒,若将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来,能否再次用BamH _(填:可以、不可以、不一定),原因是:_。 3.不能同时选用Msp (C CGG)、BamH (G GATCC)两种限制酶,原因是_。 4.若受体细胞能够在含有抗生素A和抗生素B的培养基上都可以生长,是否表明已成功导入目的基因?为什么?_ _。 5. 若用Sau3A 切图2质粒最多可能获得_种大小不同的DNA片段。 例2:三模拉练一:结合提供的具体图表信息,限制酶的识别序列和图示限制酶的位置、目的基因的特点、重组DNA分子的特点,选择合适的限制酶序列,灵活应用同尾酶 25.为培育转固氮基因的小麦新品种,科研人员利用土壤农杆菌的Ti质粒和普通质粒按下图构建了双元载体系统(Ti辅助质粒和T-DNA给体质粒),图中vir基因编码产物能激活T-DNA转移,ori为复制原点,tmr和tms为致瘤基因,LB和RB为T-DNA两端的重复序列,kanr为卡那霉素抗性基因,terr为四环素抗性基因,下表是几种限制酶识别序列及切割位点。请回答下列问题: (3)为防止植物形成“肿瘤”,研究人员按上图构建了双元载体系统。图中过程①需先用 限制酶处理Ti质粒以去除致瘤基因,再用 酶将经过处理的固氮基因接入Ti质粒,以构建重组质粒;过程②用 限制酶处理重组质粒,获得含vir基因的DNA片段和含固氮基因的T-DNA,再经过程③④分别构建Ti辅助质粒和T-DNA给体质粒。 (4)科研人员用限制酶EcoRI和Sau3AI处理T-DNA给体质粒,完全酶切后可以得到含 条带的凝胶电泳图谱。 (5)将构建的Ti辅助质粒和T-DNA给体质粒通过 方法同时导入土壤农杆菌内,选择在含有 的培养基上能形成菌落的土壤农杆菌去感染小麦细胞。该过程中T-DNA给体质粒并不含有vir基因,但仍能将转化成功的原因是 。 二、有关基因表达载体的组成及各部分作用的问题 (一)有关启动子的问题: 1.启动子的位置及作用:位于基因的上游,紧挨着转录的起始位点,是RNA聚合酶识别和结合位点,启动转录 例1:若某人获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子,如上图所示。这三种重组子中,不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有 ,不能表达的原因是 。 例2:构建基因表达载体时,若目的基因插入在启动子的上游,则转基因动物无法生产相应的外源蛋白,原因是:_。 例3:(2020山东高考)根据启动子的作用推测,Wx基因启动子序列的改变影响了_,从而