项目4 植物组织培养快速繁殖技术课件高等教育出版社

农业生物技术 项目4 植物组织培养快速繁殖技术 项目目录 项目导入 任务4.1 初代培养 任务4.2 继代培养 任务4.3 壮苗与生根培养 任务4.4 驯化移栽与苗期管理 项目目录 项目导入 小刘想从事某种果树的组织培养快速繁殖研究，前期他已经建好组培实验室，仪器设备也准备完毕，接下来就是如何进行该果树的植物组培快繁。那植物组培快繁具体包括哪些流程呢？每一个流程又是如何操作的? 任务4.1 初代培养 任务目标 任务准备 任务实施 任务反思 1.了解外植体的成苗途径。 2.掌握外植体选择的原则和预处理方法。 1.能根据培养的植物种类选择合适的外植体并进行正确的预处理。 2.能熟练、规范地对外植体进行消毒和接种。 任务目标 一、初代培养的概念 二、外植体的成苗途径 三、外植体的选择 四、外植体的处理与接种 五、培养 任务准备 一、初代培养的概念 初代培养旨在获得无菌材料和无性繁殖系。即接种某种外植体后，最初的几代培养。 二、外植体的成苗途径 （一）顶芽和腋芽的成苗 （二）不定芽的成苗 （三）体细胞胚状体的成苗 （四）原球茎的发育 三、外植体的选择 理论上讲，植物的任何活器官、细胞或组织都能作外植体。但不同种类植物、不同组织和器官对诱导条件的反应往往是不一致的，外植体选择的合适与否决定着组织培养的难易程度。 （一）外植体选择的原则 1.选择优良的种质 2.选择幼嫩的、生理状态良好的材料 3.选择生长旺盛、再生能力强的材料 4.选择来源丰富的材料 5.选择合适的外植体大小 （二）外植体的选择部位 木本植物、能形成茎段的草本植物以采取茎尖和茎段比较适宜，能在培养基的诱导下萌发出侧芽，成为中间繁殖体。 有些草本植物植株短小或没有显著的茎，可用叶片、叶柄、花萼、花瓣作外植体。 四、外植体的处理与接种 （一）外植体的预处理 1．根与地下组织器官 剪除老根、烂根；切除损伤和污染严重的部位。 用软毛刷清除泥土、虫卵等物。 2．茎尖与茎段 削除或剪除枝条上的叶片、刺、卷须等附属物，软质枝条用软毛刷蘸肥皂水或洗涤液刷洗，硬质枝条可用刀刮除枝条表面的蜡质、茸毛等。枝条可剪成长4-5 cm，带2-3个腋芽的茎段。 3．叶片 一般叶片表面有覆盖有油脂、蜡质、茸毛等，可用软毛刷蘸肥皂水或洗涤液刷洗，较大的叶片可剪成若干带叶脉的叶块，其大小以方便放入冲洗容器中冲洗即可。 4．花器 花器一般较干净，不用修整即可直接冲洗消毒。 5．果实、种子、胚和胚乳 对于种皮密度较大、透性较差和种子可先去种皮或用低浓度的盐酸浸泡或用机械打磨，再进行进一步的消毒。 （二）外植体的表面灭菌与接种 五、培养 组培所需的条件包括：温度、湿度、光照；培养基组成、pH值、渗透压等各种环境条件。 这些环境条件都会影响组织培养育苗的生长和发育。 1．温度 大多数植物组织培养都在23-27℃之间进行，一般采用（25土2）℃。 温度不仅影响植物组织培养育苗的生长速度，也影响其分化增殖以及器官建成等发育进程。 2．光照 主要表现在光强和光照时间（光周期）方面。 光照强度：2000-3000 lx 光照时间：连续16h光照、8h黑暗 3．湿度 影响组织培养的湿度包括以下两个方面：培养容器内的湿度和培养室内环境的湿度。 一般要求培养室内要保持70％～80％的相对湿度。 4．培养基的pH值 大多数植物适宜的pH值在5.6～6.5之间，一般培养基皆要求5.8。 如果pH值不适则直接影响外植体对营养物质的吸收，进而影响其分化、增殖和器官的形成。 5．渗透压 培养基中由于有无机盐类、蔗糖等化合物，因此，会影响渗透压的变化。 通常1-2个大气压对植物生长有促进作用，2个大气压以上对植物生长有阻碍作用，而5-6个大气压植物生长会完全停止，6个大气压植物细胞就不能生存。 6．气体 氧气是组织培养中必需的因素，瓶盖封闭时要考虑通气问题，可用附有滤气膜的封口材料。 固体培养基可加入活性炭来增加通气度，以利于发根。 接种时应避免把外植体全部埋入培养基中，以免造成缺氧。 月季外植体的消毒与接种实训 一、目的与要求 二、仪器用具与试剂 三、方法与步骤 四、注意事项 五、观察记录 六、评价与考核 任务实施 掌握月季外植体的选择、清洗、消毒、切割、接种等操作技术；通过无菌操作训练，掌握植物组织培养中的无菌操作技术。 一、目的与要求 。 1、仪器用具 2、