内容正文:
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3.2基因工程的基本操作程序学案
学习目标
1. 阐明基因工程的原理和基本操作程序
2. 针对人类生产或生活中的某一需求,选取适当的基因工程的技术和方法,尝试设计获得某一转基因产品的方案
3. 尝试进行PCR的基本操作并用电泳鉴定PCR的产物
基础知识
一、目的基因的筛选与获取
1.目的基因概念:
在基因工程的设计和操作中,用于_________________或_________________等的基因就是目的基因,根据不同的需要,目的基因是不同的,主要是指_________________;
例如:与生物抗逆性、优良品质、生产药物、毒物降解、工业用酶等相关的基因
2.筛选合适的目的基因:
(1)方法:从相关的________和_________的基因中进行筛选
随着测序技术的发展,以及序列数据库(GenBank)、序列比对工具(如BLAST)等的应用,越来越多的基因的结构和功能为人们所知,为找到合适的目的基因提供了更多的机会和可能
(2)实例:Bt抗虫蛋白基因(Bt基因)的筛选过程
苏云金杆菌(Bt)制成的生物杀虫剂广泛用于防治棉花虫害
苏云金杆菌的杀虫作用 有关
掌握了Bt基因的
对Bt基因的表达产物 有较为深入的了解:苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴孢晶体蛋白(Bt抗虫蛋白),破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫
<相关信息>
Bt抗虫蛋白的抗虫原理:当Bt抗虫蛋白被 后,多肽与害虫肠上皮细胞的 ,导致细胞膜穿孔,最后造成害虫死亡。
<思考>抗虫棉中的Bt抗虫蛋白会不会对人畜产生危害?
3.利用PCR获取和扩增目的基因
(1)PCR的概念:
PCR是_______________的缩写,是一项根据______________的原理,在____提供参与DNA复制的_______与_________,对____________________进行________的技术;
①全称:
②原理:
③操作环境:
④目的:
⑤优点:
(2)DNA复制所需的基本条件:
参与的组分
在DNA复制中的作用
解旋酶
DNA母链
4种脱氧核苷酸
DNA聚合酶
引物
引物是一小段能与________的一段碱基序列________的____________
(3)PCR反应过程
①变性
当温度上升到 时,
②复性
当温度下降到 时,两种引物通过 与两条单链DNA结合
③延伸
当温度上升到 时,溶液中的 在耐高温的DNA聚合酶的作用下,根据 原则合成新的DNA链
第一轮循环的 作为第二轮反应的模板,经过 三步产生第二轮循环的产物
第二轮循环的 作为第三轮反应的 ,经过 三步产生第三轮的产物;
完成以后,常采用 来鉴定PCR的产物
过程归纳:
目的基因DNA________后________,____与单链相应互补序列结合;然后以_______为模板在__________作用下进行_____,即将4种__________加到__________,如此重复循环多次。
每次循环一般可以分为_____、_____、_____三步。
由于延伸后得到的_____又可以作为下一个循环的_____,因而每一次循环后目的基因的量可以增加_____,即成_____形式扩增(约为 ,其中n为扩增循环的次数)。
<思考>用PCR可以扩增mRNA吗?
二、基因表达载体的构建( )
1.构建基因表达载体的目的:
(1)
(2)
2.基因表达载体的构成
(1)启动子:
①本质:一段有特殊序列结构的____片段
②位置:位于基因的____,紧挨____________
③功能:
诱导型启动子:
(2)终止子:
①本质:一段有特殊序列结构的____片段
②位置:位于基因的_____
③功能:
(3)标记基因:
①作用:
②常见类型:
(4) :如Bt基因。
(5)复制原点: