3.1DNA的粗提取与鉴定课件2023-2024学年高二下学期生物人教版选择性必修3

请你根据图3-3中的相关信息找到两条片段上EcoRI的识别序列和切割位点。然后，用剪刀进行“切割”。待切割位点全部切开后，将从下面那条DNA链上切下的片段重组到上面那条DNA链的切口处，并用透明胶条将切口粘连起来。 思考·讨论 p73 1.剪刀和透明胶条分别代表哪种“分子工具” ？ 剪刀代表限制酶；透明胶条代表DNA连接酶。 2.你制作的黏性末端的碱基能不能互补配对？如果不能，可能是什么原因造成的？ 如果制作的黏性末端的碱基不能互补配对，可能是剪切位点或连接位点选得不对，也可能是其他原因。 3.你插入的DNA片段能称得上一个基因吗？ 不能，因为基因的长度一般在100个碱基对以上。 思考･讨论 1.为什么不同生物的DNA分子能拼接起来？ 2.为什么一种生物的基因可以在另一种生物细胞内表达？ (1)DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸。 (2)双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构。 (1)基因是控制生物性状的独立遗传单位。 (2)遗传信息的传递都遵循中心法则。 (3)生物界共用一套遗传密码。 限制酶 DNA连接酶 载体 ①对受体细胞无害； ②有一个至多个限制酶切割位点； ③有特殊的标记基因； ④能自我复制或能整合到宿主DNA上。 质粒、 噬菌体 、动植物病毒 基因工程的基本工具 作为载体的条件 种类: 磷酸二酯键 来源： 主要来源于原核生物 特点： 作用部位： 具有专一性 结果： 形成黏性末端或平末端 连接部位：磷酸二酯键 种类： E.coliDNA连接酶、T4 DNA连接酶 作用： 把两条双链DNA片段拼接起来 小结 DNA的粗提取与鉴定 实验原理： 1、DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精 2、DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于 2mol/L NaCl溶液 3、在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。 DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法去除其他成分，对DNA进行提取 基础知识： 新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等都可以作为实验材料，但提取DNA的方法可能稍有不同 不能，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体， 几乎不含DNA 1、实验材料： 思考：能否选取牛、羊、猪等哺乳动物成熟的红细胞作为DNA 提取的材料？ 材料选择： 2、选取原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑,但是，选用DNA 含量相对较高的组织，成功的可能性更大。 ①研磨液 ②体积分数为95%的酒精 ③2mol/L 的NaCl溶液 ④二苯胺试剂 ⑤蒸馏水 含有EDTA、SDS、Tris和HCl 析出DNA 溶解DNA 鉴定DNA，要现配现用 实验试剂： 研磨液 试剂 中文名称 作用 Tris 三羟甲基氨基甲烷 维持缓冲液pH值 EDTA 乙二胺四乙酸 抑制DNA水解酶，防止DNA被水解 SDS 十二烷基硫酸钠 使蛋白质变形，与DNA发生分离 HCl 盐酸，浓度：2mol/l 将溶液调节pH至8 1、研磨 实验步骤： 2、过滤 3、析出 4、鉴定 称取30g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10mL 研磨液，充分研磨 研磨的目的： 破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中 方法一：在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液 方法二：可直接将研磨液倒入塑料离心管中，1500r/min的转速下离心5min，再取上清液放入烧杯中 1、研磨 2、过滤 上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质？ 可能含有核蛋白、多糖、RNA等杂质。 2、过滤 注意： 搅拌时应轻缓、并沿一个方向，减少DNA断裂，以便获得 较完整的DNA分子 3、析出 在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)静置2-3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA 方法一：用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分 方法二：将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干 实验组 对照组 水浴加热 4、鉴定 对照组：2mol/L的NaCl溶液5mL+4mL的二苯胺试剂，沸水中加热5min —（现象）—试管内溶液呈无色 实验组：2mol/L的NaCl溶液5mL+