精品解析：2024届浙江省宁波十校联盟高三一模生物试题变式题22-24

1. 某DNA病毒对动物养殖业危害十分严重。研究人员拟以该病毒抗原蛋白A来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。 回答下列问题： （1）获取基因A：用于制备蛋白A的基因称为__________，获取该基因的常用方法是先建立__________，用一定方法“钓取”相应基因克隆片段后通过__________技术扩增，扩增的原料是__________。下列对引物的叙述错误的是__________。 A.两个引物之间不应有互补性 B.引物自身不存互补序列 C.引物与模板链复制起始端碱基互补 D.引物的碱基包含AGCU四种 （2）工程菌转化：将工程菌放于低温、低浓度__________溶液中，造成细胞膜通透性改变，成为__________细胞，通过一定手段将外源DNA导入细胞完成转化。 （3）筛选获得杂交瘤细胞：在杂交瘤细胞筛选中，常使用特殊选择培养基如__________培养基，该培养基对__________和__________两类细胞的存活和繁殖具有抑制作用。 （4）特定杂交瘤细胞的培养和单克隆抗体的筛选：特定杂交瘤细胞培养常用搅拌式发酵罐，培养时需注意控制如__________等条件（写出2点）。发酵罐中营养物质通常需加入葡萄糖、氨基酸、激素、无机盐和__________，以及诱导抗体分泌的化学物质，如丁酸钠。发酵罐内细胞增殖形成__________（细胞株/细胞系），其分泌的抗体可利用__________技术筛选。罐内上清液中单克隆抗体含少量杂质，可采用__________方法纯化。 2. 美西螈具有很强再生能力。研究表明，美西螈的巨噬细胞在断肢再生的早期起重要作用。为研究巨噬细胞的作用机制，科研人员制备了抗巨噬细胞表面标志蛋白CD14的单克隆抗体，具体方法如下。回答下列问题： （一）基因工程抗原的制备 （1）根据美西螈CD14基因的核苷酸序列，合成引物，利用PCR扩增CD14片段。已知DNA聚合酶催化引物的3’—OH与加入的脱氧核苷酸的5’—P形成磷酸二酯键，则新合成链的延伸方向是_____（填“ 5’→3’ ”或“ 3’→5’ ”）。 （2）载体和CD14片段的酶切位点及相应的酶切 抗性基因序列如图1所示。用Xho I和Sal 1分别酶切CD14和载体后连接，CD14接入载体时会形成正向连接和反向连接的两种重组DNA．可进一步用这两种限制酶对CD14的连接方向进行鉴定，理由是_____。 培养能表达CD14蛋白的大肠杆菌，分离纯化目的蛋白。 （二）抗CD14单克隆抗体的制备流程如图2所示： （3）步骤①和步骤⑤分别向小鼠注射_____和_____。 （4）步骤②所用的SP2/0细胞的生长特点是_____。 （5）吸取③中的上清液到④的培养孔中，根据抗原—抗体杂交原理，需加入 ① 进行专一抗体检测，检测过程发现有些杂交瘤细胞不能分泌抗CD14抗体，原因是 ② 。 （6）步骤⑥从_____中提取到大量的抗CD14抗体，用于检测巨噬细胞。 3. 抗体药物偶联物（ADC）是一类通过连接头将细胞毒性药物连接到单克隆抗体的靶向生物药剂，能对靶向细胞进行选择性杀伤。第三代ADC具有更低的偶联脱落速度，更高的药物活性以及低抗原水平下的高细胞活性。ADC通常由抗体、接头和药物（如细胞毒素）三部分组成，它的作用机制如图所示。 （1）ADC药物所需抗体分子的基本要求是优先结合靶细胞上的抗原，从而将细胞毒药物浓缩在肿瘤部位，即单克隆抗体要具有______的特点。药物在靶细胞内释放并起作用，同时诱导______破裂，加速了癌细胞的凋亡。 （2）我国科兴及北京生物两款新冠灭活疫苗均使用Vero细胞（非洲绿猴肾细胞的传代细胞系）进行病毒扩增培养（见图）。 ①动物细胞工程常用的技术手段有多种，其中______是其他动物细胞工程技术的基础。Vero细胞的培养应在培养箱中进行，箱内的气体环境条件为______。 ②Vero细胞的传代培养过程中需要使用______酶使细胞分散，并在合成培养基中加入______等天然成分。此外，在培养过程中，应定期更换培养液，目的是______。 ③将已对新冠病毒发生免疫的B淋巴细胞和Vero细胞系获得杂交细胞，再经过______筛选、克隆化培养和______检测，获得产生特定抗体的______，用以生产单克隆抗体。 4. 在肿瘤患者的治疗中，被动免疫治疗是指被动地将具有抗肿瘤活性的免疫制剂或细胞回输给肿瘤患者机体进行治疗，该治疗方案适用于肿瘤晚期患者，主要分为单克隆抗体治疗和过继性细胞治疗两类，其中过继性细胞治疗相关过程如图所示。回答下列问题： （1）在单克隆抗体治疗中，为了获取能产生抗肿瘤细胞的单克隆抗体的杂交瘤细