内容正文:
第4讲 捕获光能的色素和结构 2023.10.10
考点一 捕获光能的色素
一、实验原理与过程
(1)实验原理
①提取色素:叶绿体中的色素可以溶解在有机溶剂无水乙醇(或丙酮、苯、汽油、石油醚等)中(不溶于水)。也可用体积分数为95%的乙醇+无水碳酸钠(除去乙醇中的水)
②分离色素:各种色素在层析液中的溶解度不同,溶解度高的随层析液在滤纸条上扩散的快,反之则慢。【层析液:由20份在60~90℃下分馏出来的石油醚,2份丙酮和1份苯混合而成。易挥发】
方法:纸层析法
(2)实验步骤
1、提取绿叶中的色素
①取适量菠菜叶5g左右,去除粗叶脉,剪碎,放入研钵中。(保证滤液中色素含量,应取新鲜绿色叶片)
②加少许二氧化硅(或石英砂)和碳酸钙,加5~10mL无水乙醇,迅速充分研磨成匀浆。
二氧化硅作用:有助于研磨充分,(破坏细胞结构,使色素完全释放)
碳酸钙作用:防止研磨中色素破坏,保护叶绿素。(研磨细胞破碎,液泡中有机酸出来,叶绿素在酸性条件下易破坏,碳酸钙中和酸,保护色素)
注意:色素的提取最好在弱光下进行,因为叶绿素不稳定,见光易分解。
无水乙醇作用:溶解色素(注意少量多次加入)
迅速充分:尽量减少无水乙醇挥发,并充分溶解色素
③将研磨液迅速倒入漏斗,放一块单层尼龙布(不能用滤纸),过滤
④收集滤液,棉塞塞严(防止滤液挥发和色素被氧化)
2、制备滤纸条
①将干燥的定性滤纸剪成滤纸条。(干燥会使层析液在滤纸条上的快速扩散,不干燥会导致色素带分离不明显)
②在滤纸条的一端剪去两角(边缘扩散过快,剪去两角减少边缘效应,使色素在滤纸条上扩散均匀,便于观察)
③并在距离去角一端1cm处用铅笔(不可用墨水笔)画一条细横线
3、画滤液细线:用毛细吸管吸取少量滤液,沿铅笔线均匀地画出一条细线,待滤液干燥后,再画一两次(使分离出的色素带清晰分明)。注意:滤液细线要直、细、齐,使分离的色素带平整、不重叠
4、分离绿叶中的色素:将适量层析液倒入试管(或烧杯)中,插入滤纸条,有滤液细线一端朝下,用棉塞塞紧试管口(或盖上培养皿)。
注意:滤液细线不能触及层析液,防止色素直接溶解到烧杯内的层析液中(导致向滤纸条扩散的色素少)。(若滤液细线浸没层析液则色素直接溶解在层析液中,滤纸条上无色)
5、观察与记录
(3)实验结果
①绿叶中色素有多种(其中4种分离开在色素带上),各色素都是与特定蛋白质结合。
②若是圆形滤纸中央点一滴层析液,对叶绿体中色素进行层析会得到近似同心的四个色素环,由外到内依次是:橙黄色、黄色、蓝绿色、黄绿色
异常现象
原因分析
收集到的滤液绿色过浅
①未加石英砂(二氧化硅),研磨不充分;
②使用放置数天的菠菜叶,滤液色素(叶绿素)太少;
③一次加入大量的无水乙醇,提取液浓度太低(正确做法:分次加入少量无水乙醇);
④未加碳酸钙或加入过少,色素分子被破坏
滤纸条色素带重叠
①滤液细线不直;
②滤液细线过粗
滤纸条无色素带
①忘记画滤液细线;
②滤液细线接触到层析液,且时间较长,色素全部溶解到层析液中
此外:滤液细线只画一次,滤纸条未干燥处理,会影响色素带颜色深浅
二、色素种类及吸收光谱
色素种类
吸收光
吸收光谱图示
叶绿素(含量约占3/4)
叶绿素a
吸收红光和蓝紫光
叶绿素b
类胡萝卜素(含量约占1/4)
胡萝卜素
吸收蓝紫光
叶黄素
记忆方法:“blue”叶绿素b吸收蓝紫光峰值更大,“red”叶绿素a吸收红光峰值更大。
关于光合色素的4点提醒
(1)可进行光合作用的细胞不一定都含有叶绿体(如蓝细菌等),但是都含有光合色素。
(2)叶绿素主要吸收红光(640nm~660nm)和蓝紫光(430nm~450nm),对其他波段的光并非不吸收,只是吸收量较少。类胡萝卜素主要吸收蓝紫光,不吸收红光等波长的光
【补充:太阳光300nm~2600nm,可见光400nm~760nm,小于400nm为紫外光,大于760nm为红外光,一般情况下,光合作用所利用的光都是可见光。】
(3)植物叶片呈现绿色的原因是叶片中的色素对绿光的吸收少,绿光被反射出来。
(4)色素溶液在透光下呈绿色,在反射光下呈棕红色的现象称荧光现象。(叶绿素在溶液中被光激发后产生荧光和热(不能产生氧气))
(5)植物的液泡中含有的色素是水溶性色素,不溶于有机溶剂,不参与光合作用。(注意:枫叶变红与液泡中红色花青素含量有关)
三、叶绿体色素的分布和功能
(1)分布:叶绿体类囊体薄膜上。
【回顾叶绿体相关知识】叶绿体的结构适于进行光合作用
每个基粒都含有两个以上的类囊体,多者可达100个以上。极大地扩大了受光面积。吸收光能的4种色素和许多进行光合作用所必需的酶就分布在类囊体的薄膜上。
(2)功能:吸收、传递和转