第十三章  平面色谱法（课件）- 《药用化学基础（分析化学）》同步教学（劳保版·2023）

第十三章  平面色谱法 薄层色谱法 平面色谱法概述 01 02 03 04 目录 纸色谱法 实训十五 酚酞片中荧光母素的检查 目前，色谱法在医学检验、卫生监测、食品及药品检验等领域的重要分析手段，具有灵敏度高、选择性高、分离效能高、分析速度快及应用范围广等优点。在《中国药典》（ 2020版）里，中药材及其制剂的鉴别中，多数都应用了薄层色谱法，比如人参、牛黄、丁香等。 学习导学 §13-1 平面色谱法概述 学习目标 1.掌握 色谱法的基本原理 2.熟悉 色谱法的分类 3.了解 色谱法的特点 一、原理 1.原理 主要是利用样品中的各组分在流动相与固定相之间的分配系数差异而实现分离。通过两相的相对运动，使物质在两相中进行多次反复分配，分配系数大的物质（组分）迁移速度慢，反之则迁移速度快，从而被分离。 组分 固定相 流动相 图13-1 吸附柱色谱法的色谱过程示意图 一、原理 2. 分配系数K 是指在一定温度和压力下，某组分在两相间的分配达到平衡时的浓度（或溶解度之比），即： 二、分类 流动相是气体。当固定相是固体时，称为气-固色谱；固定相是液体时，称为气-液色谱。 液相色谱法 液相色谱法 按两相物理状态分类 流动相是液体。当固定相是固体时，称为液-固色谱；固定相是液体时，称为液-液色谱。 二、分类 按分离原理分类 离子交换色谱法 吸附色谱法 利用不同组分对固定相表面吸附中心吸附能力的差别而实现分离目的的方法。 利用不同组分在固定相和流动相中的溶解度的差别而实现分离目的的方法。 分配色谱法 利用不同组分因分子大小不同受到固定相的阻滞差别而实现分离目的的方法。 分子排阻色谱法(也称为空间排阻色谱法) 利用不同组分离子交换能力的差别而实现分离目的的方法。 二、分类 纸色谱法(PC) 柱色谱法(CC) 将固定相装在色谱柱内，流动相携带样品自上而下移动使不同组分分离的方法。 将固定相均匀地涂布于玻璃板上形成厚薄均匀的薄层，点样后用流动相展开使不同组分分离的方法。 薄层色谱法(TLC) 以色谱滤纸为载体，滤纸纤维上吸附的水为固定相，点样后用流动相展开使不同组分分离的方法。 按操作形式分类 (1) 灵敏度高 (2) 选择性高 (3) 分离效能高 (4) 分析速度快 (5) 应用范围广 三、特点 §13-2 薄层色谱法 学习目标 1.掌握 薄层色谱法的原理、操作方法和定性、定量的应用。 2.了解 薄层色谱法的吸附剂和展开剂，以及薄层色谱法的应用。 1.概念： 将固定相（如吸附剂）均匀地涂铺在具有光洁表面的玻璃、塑料或金属板上，形成0.25～1mm厚的薄层，在此薄层上进行色谱分离的方法称为薄层色谱法。 一、原理 2.比移值Rf： 一、原理 图13-2 Rf值的测量示意图 2.比移值Rf： 根据Rf值的定义，其值在0～1之间变化。 分配系数越小，Rf值越大。 组分之间的分配系数相差越大，则各组分的Rf值相差也越大，表示越易分离。 一、原理 3.影响比移值Rf的因素： 展开剂的组成 展开时的温度 展开剂蒸气的饱和程度 薄层的性能 一、原理 二、仪器与材料 １.薄层板 按支持物的材质分为玻璃板、塑料板或铝板等。 按固定相种类分为硅胶薄层板、键合硅胶板、微晶纤维素薄层板、聚酰胺薄层板、氧化铝薄层板等。 按固定相粒径大小分为普通薄层板（10～40μm）和高效薄层板（5～10μm）。 二、仪器与材料 2.点样器 一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。 二、仪器与材料 3.展开容器 上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭。 水平展开用专用的水平展开槽。 二、仪器与材料 4.显色装置 喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出； 浸渍显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用； 蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。 二、仪器与材料 5.检视装置 为装有可见光、254nm及365nm紫外光光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄图像用。 暗箱内光源应有足够的光照度。 二、仪器与材料 6.薄层色谱扫描仪 系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量的分析仪器。 三、操作方法 1.薄层板的制备 干法铺板 操作简单，只适用于氧化铝和硅胶。 铺成的软板不坚固、易松散，展开时只能近水平展开，显色时易吹散，操作时应非常小心、细致。 软板一般用于摸索色谱展开的条件。 三、操作方法 1.薄层板的制备 湿法铺板 倾注法制板 平铺法制板 机械涂铺法制板 三、操