内容正文:
第1讲 基因工程
一、基因工程的基本工具
二、基因工程的操作程序
三、动物基因工程与植物基因工程
1.动物基因工程:用于提高动物生长速度从而提高产品产量;用于改善畜产品品质;用转基因动物生产药物;用转基因动物作器官移植的供体等。
2.植物基因工程:培育抗虫转基因植物、抗病转基因植物和抗逆转基因植物;利用转基因改良植物的品质。
四、基因诊断与基因治疗
基因治疗
基因诊断
原理
基因重组及基因表达
DNA分子杂交
方法
将正常基因导入有基因缺陷的细胞中,使该基因的表达产物发挥功能,以达到治疗的目的
制作特定DNA探针与病人样品DNA混合,分析杂交带情况
进展
临床试验
临床应用
五、蛋白质工程
(1)限制酶来源于原核生物,为什么不能切割自己的DNA分子?
提示:限制酶具有特异性,即一种限制酶只能识别特定的碱基序列,并在特定的位点上进行切割。限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物DNA分子中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。
(2)切取目的基因与切割载体时“只能”使用“同种酶”吗?
提示:①在获取目的基因和切割载体时通常用同种限制酶,以获得相同的黏性(或平)末端。但如果用两种不同的限制酶切割后形成的末端相同,在DNA连接酶的作用下目的基因与载体也可以连接起来。
②为了避免目的基因和载体的自身环化和随意连接,可使用不同的限制酶切割目的基因和载体,使目的基因和载体各具有两个不同的末端。
1.含有限制酶的细胞中通常还具有相应的甲基化酶,这两种酶对DNA分子有相同的作用序列,但具有不同的催化功能。甲基化酶可以对DNA序列进行修饰,使限制酶不能对这一序列进行识别和切割。回答下列问题。
(1)目前,基因工程中使用的限制酶主要是从____________生物中分离纯化获得的。构建“基因组文库”和“cDNA文库”的过程中需要使用DNA连接酶的是_________________(填“基因组文库”“cDNA文库”或“基因组文库和cDNA文库”)。
(2)含有某种限制酶的细胞,可以利用限制酶切割外源DNA,但不破坏细胞自身的DNA,其原因可能有:①_________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________;
②__________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________。
(3)利用PCR扩增目的基因的过程由高温变性(90~95 ℃)、低温复性(55~60 ℃)、适温延伸(70~75 ℃)三个步骤构成一个循环,为使得DNA聚合酶能够重复利用,选用的酶应在________℃处理后仍然具备催化活性。
解析:(1)目前,限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来的。构建基因文库时,都需要将目的基因与载体连接,并将载体储存于受体菌群中,两种文库的构建都需要DNA连接酶。(2)利用限制酶切割外源DNA但不破坏细胞自身DNA的原因,可能是自身DNA分子无该限制酶的识别序列,也可能是甲基化酶对该限制酶的识别序列进行了甲基化修饰,使该限制酶不能对这一序列进行识别和切割。(3)由于利用PCR技术对目的基因进行扩增时,需要不断升温和降温,选用的DNA聚合酶需要在高温(95 ℃)时仍能保持活性。
答案:(1)原核 基因组文库和cDNA文库
(2)①细胞自身的DNA分子没有该限制酶的识别序列
②甲基化酶对细胞自身的DNA分子进行了修饰
(3)90~95(或95)
2.叶绿体转基因技术是将外源基因整合到叶绿体基因组中,该技术能有效改良植物的品质。请回答下列问题。
(1)转基因技术的核心步骤是____________________,完成该步骤所需要的酶有________________________。
(2)将植物体细胞处理得到原生质体,再通过________________或________法,将目的基因导入原生质体,使原生质体再生细胞壁之后,通过__________________可得到相应的转基因幼苗。
(3)来自原核生物中有重要价值的外源基因,无需改造和修饰就可在叶绿体中高效表达,据此分析,原因是_____________________________________________________________
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