01第二十三章 紫外-可见分光光度法（课件）人卫版（第二版）

第二十三章 紫外-可见分光光度法 《基础化学（第2版）》 单位：山东省莱阳卫生学校 作者：接明军 目 录 第二节 分光光度计和分析方法 第一节 概述 2 掌握 光的吸收定律、吸光系数的意义并会进行有关的计算 熟悉 吸收光谱的绘制方法及意义和分光光度法的定量分析方法 学习目标 了解 分光光度法的特点 情境导入 情景描述： 维生素B12又名氰钴胺，是一种无臭无味、暗红色的晶体或结晶性粉末，其吸湿性强。属于维生素类药，是人体内源性物质，直接参与体内的一碳循环，它作为辅酶直接参与多种生化反应，尤其与红细胞的发育、神经组织间的甲基传递有直接关系，能促进红细胞的形成和再生，促进儿童发育。因此维生素B12被作为恶性贫血和周围神经病的治疗剂。 维生素B12是微生物发酵产品。它在发酵液中的浓度极低，为了提纯需去掉发酵液中的核酸、蛋白、色素、生物碱等各种杂质，其提取过程非常复杂。即使这样，产品中也不可避免含有一定量的杂质，所以其含量测定是控制产品质量的重要措施之一。 学前导语： 在《中国药典》上维生素B12含量的测定常采用分光光度法，通过本章的学习，可初步了解分光光度法的原理及其应用。 第一节 概述 紫外-可见分光光度法的特点 在紫外光区（200～400 nm）和可见光区（400～760 nm），根据待测物质对不同波长电磁辐射的吸收程度不同而建立起来的分析方法，称为紫外-可见分光光度法。 灵敏度高 被测物最低浓度一般为10-5～10-6 mol/L 1 准确度高 相对误差在1%～5% 2 操作简便、快速 采用高精仪器和电脑技术 3 应用范围广 几乎所有的无机离子和有机化合物 4 一、光的本质与物质的颜色 人的视觉所能感觉到的光称为可见光，波长范围在400～760 nm。人的眼睛感觉不到的还有红外光（波长＞760 nm）、紫外光（波长＜400 nm）、X射线等。 几种光的波长范围 7 一、光的本质与物质的颜色 单色光 具有单一波长的光 1 复合光 不同波长的光组成的光 2 光的色散 白光通过棱镜分解为红、橙、黄、绿、青、蓝、紫七种颜色的光 3 互补色光 两种适当颜色的单色光按一定强度比例混合可成为白光 4 光的互补色示意图 物质的颜色是由于物质选择性地吸收了可见光中某一波长的光而产生的 课堂问答 高锰酸钾溶液吸收了什么颜色的光？ 当一束平行的单色光照射均匀的有色溶液时，如果入射光的强度为I0，吸收光的强度为Ia，透过光的强度为It，则 I0=Ia +It 二、光的吸收定律 （一）透光率（T）和吸光度（A） 透过光的强度It与入射光的强度I0比之比称为透光度或透光率，用T 表示。 透光率越大，溶液对光的吸收越少；反之，透光率越小，溶液对光的吸收越多。 透光率的负对数称为吸光度，用A表示 透光率的负对数称为吸光度，用A表示 A越大，溶液对光的吸收越多 当一束平行的单色光通过均匀、无散射的溶液时，在单色光波长、强度、溶液的温度等条件不变的情况下，溶液的吸光度与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比，称为光的吸收定律。 二、光的吸收定律 （一）光的吸收定律 它不仅适用于有色溶液，也适用于无色溶液及气体和固体的非散射均匀体系；不仅适用于可见光区的单色光，也适用于紫外和红外光区的单色光。但它只适用于稀溶液和单色光，若为浓溶液或复合光时，误差较大。 透光率的负对数称为吸光度，用A表示 其数学表达式为 A＝KcL A—吸光度；K—吸光系数；c—溶液的浓度，mol/L或g/100ml；L—液层的厚度，cm 光的吸收定律又称为朗伯-比尔定律，是分光光度法定量分析的依据。 朗伯-比尔定律中的K称为吸光系数，是物质的特征常数之一。其物理意义是吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸光度。当溶液的浓度选用不同的表示方法时，吸光系数的表示方法也不同。 二、光的吸收定律 （二）吸光系数 透光率的负对数称为吸光度，用A表示 1．摩尔吸光系数 是指在波长一定时，吸光物质的溶液浓度为1mol/L，液层厚度为1cm时的吸光度，单位为L/(mol·cm)。常用表示。 摩尔吸光系数和百分吸光系数之间的换算关系是 二、光的吸收定律 2．百分吸光系数 是指在波长一定时，吸光物质的溶液浓度为1g/100ml，液层厚度为1cm时的吸光度，单位为100ml/(g·cm)。常用 表示。在药物分析工作中，应用较多的是百分吸光系数。 吸光系数在一定条件下是一个常数，它与入射光的波长、溶质的本性以及溶液的温度有关，也与仪器的灵敏度有关，它的数值越大，说明有色溶液对光越容易吸收，测定的灵敏度越高。一般ε值