3.1.2DNA的粗提取和鉴定课件-2022-2023学年高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

DNA的粗提取与鉴定 一、实验原理： 1．提取DNA的原理 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 如：(1)DNA在酒精溶液中的溶解性：DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。 (2)DNA在NaCl溶液中的溶解性：DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，它能溶于2mol/L的NaCl溶液。 2．鉴定DNA的原理 在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色。 DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等。 (1)不能选择哺乳动物成熟的红细胞，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体，几乎不含DNA。 二、材料用具 1.选材： 注意： 2.试剂： ①研磨液 ②体积分数为95%的酒精 ③2mol/L 的NaCl溶液 ④二苯胺试剂 ⑤蒸馏水 ——含有NaCl、EDTA、SDS、Tris和HCl ——析出DNA ——溶解DNA ——鉴定DNA，要现配现用 (2)以鸡血为实验材料时，每100 mL血液中需要加入3g柠檬酸钠， 防止血液凝固。 三、方法步骤 （视频） 1．称取约30 g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10 mL研磨液，充分研磨。 三、方法步骤 加入研磨液后，必须充分研磨，否则细胞核不会充分破碎，释放出的DNA量就会减少。 利用动物细胞提取DNA破碎细胞的方法： 动物细胞无细胞壁，可直接吸水涨破。 研磨的目的： 破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中 2．去除滤液中的杂质 方案一 在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4 ℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液 方案二 直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1 500 r/min的转速下离心5 min，再取上清液 三、方法步骤 为减少DNA的损失，过滤过程一般使用纱布过滤。 抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解； ①上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质？ 可能含有核蛋白、多糖等杂质 ②低温放置几分钟的作用： 3.DNA的析出 方案一 在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%)，静置2～3 min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA；用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分 方案二 将溶液倒入塑料离心管中，在10 000 r/min的转速下离心5 min，弃上清液，将管底的沉淀物(粗提取的DNA)晾干 三、方法步骤 搅拌时应轻缓、并沿一个方向： 减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子 1.提纯DNA时，选用体积分数为95%的冷酒精的原因：体积分数为95%的冷酒精提纯效果更佳。 预冷的酒精具有以下优点： ①可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解； ②抑制分子运动，使DNA易形成沉淀析出； ③低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少其断裂。 2.实验中出现的丝状物的主要成分是DNA，实际上每一根“丝”都是由许多DNA分子聚集在一起形成的，应用玻璃棒沿一个方向缓慢搅拌，避免破坏DNA。 3.DNA的析出 4.DNA的鉴定 取两支20 mL的试管，各加入2 mol/L的NaCl溶液5 mL。将丝状物或沉淀物溶解于其中一支试管的NaCl溶液中，再向两支试管中加入4 mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5 min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。 实验组 水浴加热 对照组 注意事项：①先溶解再加二苯胺 ②沸水浴加热目的：加快颜色反应速率 DNA耐高温 例1　若从植物细胞中提取DNA，发现实验效果不好，如看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定时不显示颜色反应等，其可能的原因是 ①植物细胞中DNA含量低　②研磨不充分　③过滤不充分　④95%冷酒精的量过大 A.①② B.③④ C.①④ D.②③ √ 例2　(2021·天津耀华中学高二期中)下表关于DNA粗提取与鉴定实验的表述，不正确的是 选项 试剂 操作 作用 A 研磨液 与生物材料混合 提取溶解DNA B 2 mol·L－1 NaCl溶液 与提取出的DNA混合 溶解DNA C 冷却的酒精 加入到离心后的上清液中 溶解DNA D 二苯胺试剂 加入到溶解有DNA的NaCl溶液中 鉴定DNA √ 1.DNA粗提取与鉴定实验中所依据的原理是 ①DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 ②DNA易被甲紫溶液染成紫色 ③溶解有DNA的NaCl溶液加入二苯胺试剂沸水浴后会呈现蓝色 ④加入体积分数为95%的冷酒精，DNA会从溶液中析出 ⑤加入体积分数为70%的冷酒精，DNA会从溶液中析出 A.①②③ B.①③④ C.②③④ D.①③⑤ 跟踪训练 1 2 3 4 5 √ 6 2.(2021·山东日照高二期中)下列有关“D