1.2.2微生物的选择培养与计数课件2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3

第2节 第2课时 微生物的选择培养和计数 1973年，科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌，进而从这种菌中提取出耐高温的DNA聚合酶。 1、实例： 聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外扩增DNA片段的技术，此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。 寻找耐高温的DNA聚合酶 筛选原因：水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 一、选择培养基 美国黄石公园 2.概念： 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。 3.原理： 人为提供_________________的条件（包括_____、_____和_____等），同时___________________________。 有利于目的菌生长 抑制或阻止其他微生物的生长 营养 温度 pH 4.实验室中微生物的筛选： 分离酵母菌、霉菌等真菌 分离固氮菌 分离自养型微生物 ④加高浓度食盐 金黄色葡萄球菌 ⑤石油是唯一碳源 能消除石油污染的微生物 ③不加含碳有机物的无碳培养基 ②不加氮源的无氮培养基 ①加入青霉素的培养基 思考：那么如果让你分离土壤中分解尿素的细菌，你应该怎么设计呢？ 3 思考讨论： 选择培养基配方的设计 尿素含氮量高，化学性质稳定，是一种重要的农业氮肥，尿素施入土壤后，被某些细菌分解成NH3，NH3再转化成NO3-、NH4+等才能被植物吸收。 尿素的立体结构 土壤中尿素分解菌之所以能将尿素分解，是因为它们能合成脲酶： CO(NH2)2+H2O 脲酶 CO2+2NH3 1、你如何设计培养基配方，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来？ 培养基添加尿素作唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素、缺乏氮源而不能生长发育繁殖，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 2、该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g 蒸馏水 定容到1000ml KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素CO(NH2)2 1.0g 琼脂 15.0g 蒸馏水 定容到1000ml 配方一：培养细菌 配方二：培养可以分解尿素的细菌 （1）从物理性质看此培养基属于哪类？从用途上属于哪类培养基？ 固体培养基。 配方二是以尿素作唯一氮源的选择培养基 （2）此培养基中共有哪些成分？在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源： 葡萄糖、尿素 氮源：尿素 成分： 碳源、氮源、水、无机盐 二、微生物的选择培养 如果想知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌，还需对土壤菌液进行稀释及科学的微生物数量测定方法---稀释涂布平板法。 2、实验的具体操作： (2)土壤取样： 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 注：取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌 (1)制备培养基： 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。 1、稀释涂布平板法: 是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 基本操作： （1）梯度稀释；（2）涂布平板。 6支试管，分别加入9ml无菌水 1ml 102 1ml 103 1ml 104 1ml 105 1ml 106 1ml 107 (3)样品梯度稀释： 微量移液器 稀释10倍菌液 101 土壤10g 在火焰旁称取土壤10g，加入90ml无菌水中，摇匀，制成稀释10倍的土壤菌液。 分别取1ml上清液，加入盛有9ml无菌水的试管中，制成不同稀释倍数的菌液。 取6支试管，分别加入9ml无菌水。 注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火焰1 ∽2cm处。 ②将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 滴 ①取少量稀释液（不超过0.1ml ），滴加到培养基表面 灼 ③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8-10s。 涂 ④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 注：各梯度分别涂布3个平板,1个不涂布作空白对照 浸 (4)取样涂布平板： （5）培养与观察： 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 空白对照 恒温培养箱 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37 ℃的恒温培养箱中培养1～2 d。 稀释涂布平板法除可以分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。 2.用平板划线法接种培养结果的图片如下。请结合图片分析，平板划线法能否达到对细菌进行计数的目的？为什