内容正文:
第十一单元 现代生物科技专题
第37讲 基因工程
1.基因工程的诞生Ⅰ。2.基因工程的原理及技术含PCR技术Ⅱ。3.基因工程的应用Ⅱ。4.蛋白质工程Ⅰ。5.实验:DNA的粗提取与鉴定。
授课提示:对应学生用书第332页
考点一 基因工程的基本工具
1.基因工程的概念
(1)供体:提供目的基因。
(2)操作环境:体外。
(3)操作水平:分子水平。
(4)原理:基因重组。
(5)受体:表达目的基因。
(6)本质:性状在受体体内的表达。
(7)优点:克服远缘杂交不亲和的障碍,定向改造生物的遗传性状。
2.理论基础和技术的发展催生了基因工程(科技探索之路)
(1)20世纪中叶,基础理论取得了重大突破
①DNA是遗传物质的证明:1944年,艾弗里等人通过不同类型肺炎双球菌的转化实验,不仅证明了生物的遗传物质是DNA,还证明了DNA可以从一种生物个体转移到另一种生物个体。艾弗里等人的工作可以说是基因工程的先导。
②DNA双螺旋结构和中心法则的确立:1953年,沃森和克里克建立了DNA双螺旋结构模型。1958年,梅塞尔松和斯塔尔用实验证明DNA的半保留复制。随后不久确立的中心法则,解开了DNA复制、转录和翻译过程之谜,阐明了遗传信息流动的方向。
③遗传密码的破译:1963年,尼伦伯格和马太破译编码氨基酸的遗传密码。1966年,霍拉纳用实验证实了尼伦伯格提出的遗传密码的存在。这些成果不仅使人们认识到,自然界中从微生物到人类共用一套遗传密码,而且为基因的分离和合成等提供了理论依据。
(2)技术发明使基因工程的实施成为可能
①基因转移载体的发现:1967年,罗思和赫林斯基发现细菌拟核DNA之外的质粒有自我复制能力,并可以在细菌细胞间转移,这一发现为基因转移找到了一种运载工具。
②工具酶的发现:1970年,阿尔伯、内森斯、史密斯在细菌中发现了第一个限制性内切酶(简称限制酶)后,20世纪70年代初相继发现了多种限制酶和连接酶,以及逆转录酶,这些发现为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。
③DNA合成和测序技术的发明:自1965年,桑格发明氨基酸序列分析技术后,1977年,科学家又发明了DNA序列分析的方法,为基因序列图的绘制提供了可能,之后,DNA合成仪的问世又为引物、探针和小分子量DNA基因的获得提供了方便。
④DNA体外重组的实现:1972年伯格首先在体外进行了DNA改造的研究,成功地构建了第一个体外重组DNA分子。
⑤重组DNA表达实验的成功:1973年,博耶和科恩选用仅含单一EcoR Ⅰ酶切位点的载体质粒pSC101,使之与非洲爪蟾核糖体蛋白基因的DNA片段重组。重组的DNA转入大肠杆菌DNA中,转录出相应的mRNA。这个实验证明了质粒不仅可以作为基因工程的载体,重组DNA还可以进入受体细胞,外源基因可以在原核细胞中成功表达,并实现物种之间的基因交流。至此,基因工程正式问世。
⑥第一例转基因动物问世:1980年,科学家首次通过显微注射培育出世界上第一个转基因小鼠。1983年,科学家又采用农杆菌转化法,培育出世界上第一例转基因烟草。此后,基因工程进入了迅速发展阶段。
⑦PCR技术的发明:基因工程问世后,1988年,由穆里斯发明的PCR技术,使基因工程技术得到了进一步发展和完善。
3.基因工程的操作工具
(1)限制性核酸内切酶(限制酶)
(2)DNA连接酶
①作用:将限制酶切割下来的DNA片段拼接成DNA分子。
②类型
常用类型
E·coli DNA连接酶
T4 DNA连接酶
来源
大肠杆菌
T4噬菌体
功能
只缝合黏性末端
缝合黏性末端和平末端
结果
恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键
③DNA连接酶和限制酶的关系
(3)载体
①
②其他载体:λ噬菌体衍生物、动植物病毒等。
③载体的作用:携带外源DNA片段进入受体细胞。
教材选修3 P6 “寻根问底”:DNA连接酶和DNA聚合酶的作用相同吗?试简要说明。
提示:不相同。DNA连接酶连接的是两个DNA片段,而DNA聚合酶连接的是单个的脱氧核苷酸。
高考总复习 生物第十一单元 现代生物科技专题
1.切割质粒的限制性核酸内切酶均能特异性地识别6个核苷酸序列。(×)
2.载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因。(×)
3.DNA连接酶能将两碱基间通过氢键连接起来。(×)
4.限制性核酸内切酶、DNA连接酶和质粒是基因工程中常用的三种工具酶。(×)
5.E·coli DNA连接酶既可连接平末端,又可连接黏性末端。(×)
6.用于载体的质粒DNA分子上至少含一个限制酶识别位点。(√)
7.载体的作用是携带目的基因导入受体细胞中,使之稳定存在并表达。(√)
1.明辨限制酶的特点与使用特点
(1)限制酶具有特异性,即一种限制酶只能识别特定的核苷酸