第45讲 基因工程-【高效备考】2024年高考生物一轮复习优质课件

第45 讲 基因工程 基因工程： 又叫做 。就是按照人们的意愿，把一种生的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里， 地改造生物 的 。 原 理： 。 操作水平： 。 结 果： 。 基因重组 DNA分子水平 定向地改造生物的遗传性状，获得人类所需要的品种。 重组DNA技术 定向 遗传性状 重组DNA技术的基本工具 基本工具 工具酶 限制性内切核酸酶 DNA连接酶 载体 基因工程的基本操作程序： 目的基因的筛选与获取 ↓ 基因表达载体的构建 ↓ 将目的基因导入受体细胞 ↓ 目的基因的检测与鉴定 核心步骤 1．（2018•北京卷•T5）用XhoI和SalI两种限制性核酸内切酶分别处理同一DNA片段，酶切位点及酶切产物分离结果如图。以下叙述不正确的是 A．如图中两种酶识别的核苷酸序列不同 B．如图中酶切产物可用于构建重组DNA C．泳道①中是用SalI处理得到的酶切产物 D．图中被酶切的DNA片段是单链DNA 【答案】D 【解析】限制酶识别特定的脱氧核苷酸序列，不同的限制酶能识别不同的核苷酸序列，由电泳图可知XhoI和SalI两种酶分别切割时，识别的序列不同，A正确；同种限制酶切割出的DNA片段，具有相同的粘性末端，再用DNA连接酶进行连接，可以构成重组DNA，B正确；SalI将DNA片段切成4段，XhoI将DNA片段切成3段，根据电泳结果可知泳道①为SalI，泳道②为XhoI，C正确；限制酶切割双链DNA，酶切后的DNA片段仍然是双链DNA，D错误。 原核生物 数千 特定核苷酸序列 磷酸二酯键 磷酸二酯键 推测限制酶在原核生物中的作用是？ 切断外源DNA，使之失效，从而保护自身 磷酸二酯键 大肠杆菌 黏性末端 黏性末端和平末端 环状双链DNA分子 噬菌体、动植物病毒 一个至多个 自我复制 受体DNA 标记 检测目的基因是否导入受体细胞 若用Mbo Ⅰ限制酶单独切割该普通质粒，则产生的DNA片段的长度为(　　) A．2.5和5.5　　　　　　　 B．2.5和6 C．5.5和8 D．6和8 √ 1．用限制酶EcoR V单独切割某普通质粒，可产生14 kb(1 kb即1 000个碱基对)的长链，而同时用限制酶EcoR V和Mbo Ⅰ联合切割该质粒，可得到三种长度的DNA片段，见下图(其中*表示EcoR V限制酶切割后的一个黏性末端)。 2．图甲、乙中的箭头表示三种限制性内切核酸酶的酶切位点，ampr表示氨苄青霉素抗性基因，neor表示新霉素抗性基因。下列叙述正确的是(　　) A．图甲中的质粒用BamH Ⅰ切割后，含有4个游离的磷酸基团 B．在构建重组质粒时，可用Pst Ⅰ和BamH Ⅰ切割质粒和外源DNA C．用Pst Ⅰ和Hind Ⅲ酶切，可以保证目的基因与质粒正确连接 D．导入目的基因的大肠杆菌可在含氨苄青霉素的培养基中生长 √ 考点二　基因工程的基本操作程序 1．目的基因的筛选与获取 (1)目的基因：主要指____________的基因。 (2)获取方法——利用PCR获取和扩增目的基因 ①原理：DNA的半保留复制。 编码蛋白质 ②条件 a．场所：在______溶液中进行，其中一般要添加Mg2＋。 b．模板：DNA双链。 c．原料：4种____________。 d．酶：__________________。 e．引物：使DNA聚合酶能够从引物的______开始连接脱氧核苷酸。 缓冲 脱氧核苷酸 耐高温的DNA聚合酶 3′端 ③过程 变性：当温度超过______℃时，双链DNA______为单链。 复性：当温度下降到______ ℃左右时，两种______通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。 延伸：当温度上升到______ ℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸在________________________的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。 90 解聚 50 引物 72 耐高温的DNA聚合酶 ④结果：每次循环后目的基因的量增加一倍，即成______形式扩增(约为2n，其中n为扩增循环的次数)。 ⑤鉴定：常采用__________________来鉴定PCR的产物。 指数 琼脂糖凝胶电泳 2．(2020·高考江苏卷改编)如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，简捷地分析出已知序列两侧的序列，具体流程如下图(以EcoR Ⅰ酶切为例)： 请据图回答问