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课时跟踪检测(四十一)
基因工程
1.某实验小组利用转基因技术培育耐盐水稻,如图1:3.(2023·意阳期来)某植物抗虫基因转录的mRNA
表示含有耐盐基因的外源DNA分子,图2表示质:下游序列已知,但其上游序列未知。现利用PCR技
粒,其上含有BamH I,Sma1和HidⅢ三种限制:
术扩增该基因,简要流程如图所示,其中①~③表示
酶的酶切位点。请回答下列问题:
有关过程,I~Ⅲ表示有关物质。请回答下列问题:
Bamll I
四环素
未知序列mRNA已知序列
Sma
抗性基因
射盐基因
外游
复制
O
引物1
DNA
原点
Bamil I Sma I HindⅢ
氨苄青
素抗基因
②加入末端转移酶
图1
图2
AAA(A)
(1)分析上图可知,欲构建重组DNA分子,应选用:
TTT(T
③PCR
AAA(A
二3Ⅲ
两种限制酶切制质粒和外源
DNA分子,使用两种不同的限制酶切割含目的基因:
(1)过程①反应体系中需要加入
酶,生成杂
的外源DNA和质粒的优点是
合双链物质I。
(2)利用DNA末端转移酶催化过程②,使cDNA单
(2)题(1)中不使用另外一种限制酶切割的原因是:
链左侧末端增加十多个腺嘌岭脱氧核苷酸序
,题(1)中构建成功的重组质粒若
列AAA(A)。,进而利于过程③扩增获得目的基因
用该酶切割能产生
种不同的DNA片段。
:
序列Ⅲ。在过程③反应体系中还需要添加新的引
(3)质粒中抗性基因的作用是
物,新引物的碱基序列应该是
成功导人了目的基因的受体细胞(受体细胞本身不:
(3)得到物质Ⅲ后,通常还需在其两端增加
含四环素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因),不能在:序列,以便切割后与相应的运载体重组。将基因表
骨
(填“氨苄青霜素”或“四环素”)的培养基中:
达载体导入大肠杆菌之前,还需用
处理大
进行培养
肠杆菌。
(4)从个体水平上鉴定耐盐基因是否成功表达的方:
(4)在利用PCR技术扩增某DNA中的某一目的基
法是
因时,需要用到的酶是
,依据
的原理是
2.已知生物体内有一种蛋白质(P),该蛋白质是一种4.(2023·南昌模纵)1m-Fusion技术是一项新型的无
转运蛋白,由305个氨基酸组成。如果将P分子中
缝克隆技术。该技术关键是要在目的基因两端构建
158位的丝氨酸变成亮氨酸,240位的谷氨酰胺变成:
与线性化质粒末端相同的DNA序列(即同源序列,
苯丙氨酸,改变后的蛋白质(P:)不但保留P的功
通常为15~20bp),然后用1n-Fusion酶处理即可实
能,而且其有了酶的催化活性。回答下列问题:
(1)从上述资料可知,若要改变蛋白质的功能,可以
现无缝连接。它的操作步骤大致为:①质粒线性化:
②PCR扩增出两端含线性化质粒同源序列的目的
考虑对蛋白质的
进行改造。
(2)以P基因序列为基础,获得P,基因的途径有修:
基因:③目的基因与线性化质粒同源区域在In-Fusion
饰
基因或合成
基因,所获得
酶作用下形成重组质粒:④将重组质粒导人受体细胞。
的基因表达时遵循中心法则,中心法则的全部内容
引物1:
引物2引物A日的菇因
包括
的复制,以及遗传信息在不同分子之
质粒
53/
3
-5
间的流动,即:
物B
PCR
(3)蛋白质工程也被称为第二代基因工程,其基本途
《线件化质罚
m
m
径是从预期蛋白质功能出发,通过
同源序列1、词源序列2
m
衫
,进而确定相对应的脱氧核苷
镜化通粒h-i网on
导入受体
酸序列,据此获得基因,再经表达、纯化获得蛋白质,
问源序列
、正组质粒
@细胞
互换重组
之后还需要对蛋白质的生物
进行鉴定,
409
(1)过程①中需要用到的酶有
另外,:在一起,导入哺乳动物的
中,再利用SRY
利用
处理也可以直接得到线性化质粒。
基因(Y染色体上的性别决定基因)探针进行检测,
(2)据图分析,为保证扩增出所需的目的基因,引物:
将检测反应呈
(填“阳”或“阴”)性的胚胎进
A或引物B要依据
序列进行
行移植培养。
设计。过程②经过
轮循环即可初步得到:6.(2023·太最一换)I.转基因草莓中有能表达乙肝
符合要求的目的基因片段。
病毒表面抗原的基因,由此可获得用来预防乙肝的
(3)过程③中,同源序列1,2中的碱基排序不同,这
种新型疫苗,其培育过程如图所示(①至④代表过
样设计的好处是
程,A至C代表结构或细胞)。请据图回答:
①
图示1 Fusion技术可作为模型使用,一般来说只需
Ti质粒B
农杆
要改变图中的
,即可快速构建出
④
了名☒
另一种目的基因的重组质粒。
}草荷
(4)若目的基因是氨苄青霉素抗性基因,以大肠杆菌
幼苗
作为受体细胞时,过程④需要用
处理大肠
(1)图中①过程用到的酶是
,所形成的B
杆菌。
叫
5