内容正文:
动物细胞培养
动物细胞核移植
动物细胞融合
单克隆抗体
(常用技术手段)
动物细胞工程
其他动物细胞工程技术的基础
动物细胞工程常用的技术手段
生产
考点二 动物细胞培养与体细胞克隆
一、动物细胞培养
1、概念:动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成 ,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和繁殖。
单个细胞
原理:细胞增殖(有丝分裂)
目的:增加细胞数量
幼龄动物的组织或器官:
增大细胞与酶的接触面积。
吸收营养,易于培养,
排出代谢废物。
细胞分裂能力强
2、过程
幼龄动物的组织或器官:
细胞分裂能力强
增大细胞与酶的接触
面积。
吸收营养,易于培养,
排出代谢废物。
现象一:细胞贴壁
■培养瓶(皿)壁:
表面光滑、无毒、易于贴附。
现象二:
接触抑制
说明:传代培养的细胞,一般培养至 代就不容易传下去了。一般来说,细胞在传至 代左右时,增殖会逐渐减慢,部分细胞的细胞核型可能会发生变化。
当继续传代培养时,少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限,获得不死性,这些细胞已经发生了突变,正朝等同于癌细胞的方向发展。目前使用的或冷冻保存的正常细胞常在 代以内,以保持正常的二倍体核型。
10
10~50
10
核型:指染色体组在有丝分裂中期的表型,是染色体数目、大小、形态的总和。
失去接触抑制
动物组织
单个细胞悬浮液
剪碎
胰蛋白酶
加培养液
母瓶
原代培养
传代培养
分瓶
总结归纳:动物细胞培养的过程
胰蛋白酶
7
思考题:
1.动物细胞工程的基础是什么?
2.动物细胞培养的基本原理是什么?
3.进行动物细胞培养的材料一般有何特点?
动物细胞培养技术
离体的细胞在适宜的条件下可以增殖( 细胞
增殖)
一般取胚胎组织或幼龄动物的组织做动物细胞培养。因为胚胎组织或幼龄动物的组织的细胞分化程度低,增殖能力强,更易于培养。
4.哪些细胞会失去接触抑制?
5.在体外培养动物细胞需要什么物质和环境条件?
癌细胞
②营养:除糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素之外通常还需加入 等一些天然成分。
③适宜的温度:36.5 ℃±0.5 ℃;适宜的pH:7.2~7.4。
抗生素(防止杂菌污染)
培养液
血清、血浆
细胞代谢
合成培养基
7.动物细胞培养有何应用价值?
①大规模生产生物制品,如病毒疫苗、干扰素、
单克隆抗体等;
②基因工程中的受体细胞;
③用于检测有毒物质;
④用于生理、病理、药理等方面的研究,为治疗和预防
疾病提供理论依据
6.动物细胞培养液的主要成分是什么?
通常含有葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清等。
细胞的全能性
获得细胞或细胞产物
快速繁殖、培育无病毒植株、获得细胞产物等
培养目的
葡萄糖、血清、血浆
蔗糖、植物激素
培养基不同成分
液体培养基
固体培养基
培养基状态
细胞增殖
原理
动物细胞培养
植物组织培养
比较项目
植物组织培养和动物细胞培养的比较
如图所示为动物细胞培养过程中细胞增殖情况的变化曲线,图中B、E两点表示经筛选、分装后继续培养。据图分析:
(1)原代培养和传代培养的分界点是图中哪个点?
B点之前的培养称为原代培养,
之后的培养称为传代培养。
(2)AB 段和DE 段繁殖速度缓慢的
原因是什么?
AB 段发生了接触抑制;DE 段
细胞大部分衰老失去分裂能力。
(3)E点后的细胞大多数具有异倍体核型,这样的细胞
有什么特点?
E点后的细胞属于细胞系,能无限增殖。
植物体细胞
动物体细胞
植物组织培养
体外培养?
核移植:克隆
植株
动物个体
1. 概念:将动物的一个细胞的________ ,移入一个已经去掉细胞核的_________中,使其_______并发育成一个___________,这个新的胚胎最终发育成动物个体。
核移植
(难度高)
受体细胞:MⅡ中期的卵母细胞
二、动物体细胞核移植技术和克隆动物
胚胎细胞核移植:
体细胞核移植:
细胞分化程度低,恢复全能性相对容易
用核移植的方法得到的动物称为克隆动物
细胞核
卵母细胞
重组
新的胚胎
2、原理:
动物细胞核的全能性
3、类型:
4、体细胞核移植的大致过程是:
去核
重组细胞
大本P242
供体
卵细胞
A母绵羊
B母绵羊
乳腺细胞
细胞质
细胞核
细胞核移植
早期胚胎
卵裂
C母绵羊子宫(代孕母体)
胚胎移植
多莉羊
分娩
妊娠
多莉羊的培育过程
重组细胞
二动物体细胞核移植技术
◆用的是去核的减数第二次分裂中期细胞(MⅡ中期)为什么?
◆激活方法:
◆激活目的:
◆促融方法:电刺激
◆胚胎移植至代孕受体内
妊娠、分娩
供体:优质高产奶牛
受体:普通奶牛(卵母细胞的采集与培养)