第1章 第2节 第2课时 微生物的选择培养和计数(Word教参)-【新课程学案】新教材2023-2024学年高中生物选择性必修3 生物技术与工程（人教版2019 SHJL版）

开卷预习一刻钟 (一)选择培养基及微生物的选择培养 1．实验室中微生物筛选的原理 人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度和pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。 2．选择培养基 是指在微生物学中，允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 3．微生物的选择培养(稀释涂布平板法) (1)系列稀释操作(以土壤样品为例) ①将10 g土样加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。 ②取1 mL上清液加入盛有9 mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 (2)涂布平板操作 [特别提醒] 将涂布器末端浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。　　 (3)培养分离：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37_℃的恒温培养箱中培养1～2 d。在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。 (二)微生物的数量测定 1．稀释涂布平板法 计数原理 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌 计数标准 为了保证结果准确，一般选择菌落数为30～300的平板进行计数 计数方法 样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目。通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为30～300、适于计数的平板。在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值 2.显微镜直接计数法 计数方法 利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量 优点 是一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法 (三)土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 　(教材第20页“拓展应用”第2题)如图是几种纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明圈的示意图，请分析原理。 提示：刚果红与纤维素形成红色复合物，但并不与水解后的产物发生这样的反应。当在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成复合物，当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。 1．(教材第18页“相关信息”思考)细菌计数板和血细胞计数板主要适用于什么微生物的计数？ 提示：细菌计数板主要对细菌等较小的细胞计数，而血细胞计数板主要对酵母菌、霉菌孢子等较大的细胞进行计数。 2．(教材第18、19页“探究·实践”思考)利用尿素作为唯一氮源的选择培养基筛选出能分解尿素的细菌后，还可以利用什么方法进一步鉴定分离出的菌种？ 提示：分解尿素的细菌产生的脲酶将尿素分解产生氨，会使培养基的碱性增强，pH升高，因此可通过检测培养基的pH变化来进一步鉴定。通常是在培养基中加入酚红指示剂，根据指示剂是否变红来判断。 掩卷归拢5分钟 1．测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数法。 2．稀释涂布平板法常用来统计活菌的数目，但统计结果往往比实际活菌数目低。 3．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作唯一氮源的选择培养基分离该细菌。 提能点(一)　稀释涂布平板法与微生物的选择培养　 [任务驱动] 菌落总数可作为判定食品被污染程度的标志，也可以用于观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对送检样品进行卫生学评估提供证据。如图是某样品选择培养简化流程图，请分析回答下列问题： (1)对样品悬液怎样进行梯度稀释？ 提示：取1 mL样品上清液加入盛有9 mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 (2)涂布器一般是在酒精中浸泡，然后放在酒精灯火焰上灼烧灭菌，该操作的目的是什么？ 提示：杀死涂布器上的杂菌，防止杂菌污染。 (3)下图是涂布平板操作的示意图，用字母和箭头表示涂布平板操作的正确步骤。 提示：a→b→c→d。 (4)利用稀释涂布平板法纯化分解尿素的细菌时，经培养后发现培养基上出现多种菌落，可能的原因有哪些？ 提示：出现多种菌落说明有杂菌污染，可能原因有：培养基制备过程中被杂菌污染；菌液滴加到培养基过程中，无菌操作不符合要求；系列稀释时，无菌操作不符合要求；涂布器灭菌不彻底等。 [生成认知] 1．系列稀释和涂布平板后培养结果 2．平板划线法和稀释涂布平板法的比较 方法 平板划线法 稀释涂布平板法 图示 关键 操作 接种环在固体平板培养基表面连续划线 一系列的梯度稀释、涂布平板 菌体 获得 在具有显著的菌落特征的区域中挑取单个的菌落 从适宜稀释度平板上的菌落中挑取单个的菌落 成功 关键 (1)接种环的灼烧：①第一次划线前：杀死接种环上的微生物，避免污染培养物；②之后每次划线前：杀死上次划线后残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端；③划线结束后：杀死残留菌种，