1.2.2微生物的选择培养与计数课件-2022-2023学年高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

课题背景 自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合菌群中不是优势种群时，更难实现。 稀释涂布平板法呈现的杂菌群 那么我们又如何达成这一目标呢？ 科学家们应用选择性培养基解决了这一难题。 1.2微生物的培养技术及应用 高压蒸汽灭菌 液体培养基 二 微生物的选择培养与计数 教学目标 1. 阐明微生物选择培养的原理。 2. 进行土壤中分解尿素的细菌的分离和计数。 1. 科学实例：寻找耐高温的DNA聚合酶 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 筛选原因：水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 PCR是一种在体外DNA复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 1966年，布鲁克在美国黄石国家公园的一个热泉中发现了耐热的Taq细菌，并分离到耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）。 （一）选择培养基 耐高温的酶 耐高温生物体 高温环境（热泉、火山口） 寻找 寻找 培养基中加氨苄青霉素 具有氨苄青霉素抗性的菌落 没有氨苄青霉素抗性的细菌 培养基应有菌落 没有氨苄青霉素抗性的细菌被淘汰 怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌? 举例 2.实验室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 （一）选择培养基 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的 培养基，叫做选择培养基。 类型 条件 分离得到的菌种 （1）改变培养条件 （2）添加某种化学物质 （3）营养缺陷 70～80℃的高温 水生栖热菌 加入青霉素 酵母菌、霉菌等真菌 高浓度食盐 金黄色葡萄球菌 不加碳源 不加氮源 自养型微生物 固氮菌 之后讲课本P22的最上面内容 思考-讨论 选择培养基配方的设计 尿素的立体结构 尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素被土壤中某些细菌分解成NH3,再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。 这些细菌之所以能分解尿素，是因为能合成脲酶，来催化尿素分解。 讨论： 1.你如何设计培养基配方，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来？ 2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 见P18页培养基配方 设计一种选择培养基,用尿素作为唯一氮源,可以将分解尿素的细菌分离出来 1.从物理性质来讲，两者属于_____培养基， 判断依据是_________________________________； 该类培养基的主要用途为_____________________； 2.从用途上来讲，培养基二属于______培养基， 目的是为了获得_____________________； 3.两种培养基共有的培养基成分有：________________________； 培养基一的碳源为________，氮源为________； 培养基二的碳源为________，氮源为________。 培养基一 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g 蒸馏水 定容到1000ml 培养基二 KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素CO(NH2)2 1.0g 琼脂 15.0g 蒸馏水 定容到1000ml 固体 添加了凝固剂琼脂， 分离、鉴定、计数 选择 能分解尿素的微生物 碳源、氮源、无机盐、水 牛肉膏 蛋白胨 葡萄糖 尿素 讨论： 1.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（　） A. 较多的氮源物质 B. 较多的碳源物质 C. 青霉素类药物 D. 高浓度食盐 C 2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是（ ） A. CO2和N2 B. 葡萄糖和N2　　 C. CO2和尿素 D. 葡萄糖和尿素 D 对土样充分稀释后，将菌液涂布到制备好的选择培养基上，即稀释涂布平板法。 1g土壤中有多少能分解尿素的细菌？ 分离：获得分解尿素的细菌的纯培养物 计数：测定分解尿素的细菌的数量 稀释涂布平板法:是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 （二）微生物的选择培养 ①梯度 稀释 方法：稀释涂布平板法 铲取土样，将样品装入纸袋中 将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。 1mL 1ⅹ10 90mL无菌水 1ⅹ107 1ⅹ1