白细胞抗原系统检测课件

白细胞抗原系统检测 Leukocyte antigen system detection 第X章 Chapter X LOGO HERE Presenter name Author affiliation 目 录 contents 01 HLA血清学检测 02 HLA细胞学检测 HLA serology testing Granulocyte antigen system 03 HLA分子生物学检测 HLA molecular biology testing 04 粒细胞抗原抗体检测 Granulocyte antigen antibody test 01 HLA血清学检测 HLA抗原检测 掌握微量淋巴细胞毒实验的原理及其影响因素 HLA抗体检测 淋巴细胞毒方法 流式细胞仪方法 ELISA方法 Luminex检测技术 掌握不同方法的原理及其优缺点 HLA抗原检测：微量淋巴细胞毒试验 HLA抗原的血清学分型方法 用已知的抗HLA标准分型血清来检测未知淋巴细胞表面的HLA抗原进行鉴别 抗原抗体反应 抗原抗体免疫复合物在补体的作用破坏细胞膜 利用染料或其它方法鉴定和区分死活细胞 计分法：NIH计分法 微量淋巴细胞毒实验原理 患者 健康人1 健康人2 Lym Anti-A1 +补体 台盼蓝 染色 着色 不着色 不着色 LOGO HERE 4 HLA抗体血清来源 开展为了淋巴细胞毒试验，首先应具备相应的HLA抗体血清： 同种免疫刺激产生HLA同种抗体 HLA抗原免疫刺激动物产生HLA异种抗体 杂交瘤技术：单克隆抗体 人群存在的天然抗体 LOGO HERE 5 实验影响因素 孵育时间和温度 补体活性 染色和固定时间：染色时间控制在2-10分钟 HLA抗血清 HLA抗血清来源和抗体种类、抗血清效价、抗血清特性、抗血清质量 （*抗血清：是指含有单克隆或多克隆抗体的人或非人血清，又称为免疫血清） 淋巴细胞 淋巴细胞活性、纯度、数量、抗原表达异常 其他因素 抗体因素 染色因素 淋巴细胞因素 补体因素 LOGO HERE 6 血清学抗原分型方法评价 血清学方法抗原分型 检测HLA-I类和Ⅱ类抗原 检测HLA-I类抗原相对容易，常用于检测HLA-A、B抗原 检测HLA-Ⅱ类抗原需要分离和纯化B淋巴细胞 易受多种因素影响 其错误率相对较高 血清学方法检测的是抗原，基因分型检测的是碱基多态性 当HLA血清学在某一座位上只能检测到一个抗原，而基因分型存在两个不同等位基因，两者结果不一致时，应考虑到无效等位基因 HLA-I HLA-Ⅱ LOGO HERE 7 HLA抗体检测 以供者淋巴细胞作为靶细胞抗原 抗原抗体反应激活补体损伤细胞膜 判定受检者血清中是否存在HLA抗体以及抗体的滴度 易受多种因素影响，检测敏感性最低 1、补体依赖的淋巴细胞毒方法（CDC） 抗人球蛋白抗体 供者淋巴细胞 补体激活 细胞裂解死亡 吸收染料 加入抗人球蛋白抗体可提高该试验的灵敏度。多个抗人球蛋白分子与每个HLA结合的供体特异性抗体(DSA)结合，导致补体活化的扩增和随后的细胞裂解，裂解的细胞可吸收台盼蓝等染料，通过肉眼或显微镜观察。 受检者血清 DSA LOGO HERE 8 供者淋巴细胞 受检者血清 DSA 荧光标记的 抗人免疫球蛋白IgG 流式检测 荧光信号 HLA抗体检测 2、流式细胞术 以淋巴细胞作为靶细胞抗原加入待测血清后进行反应 可检测lgG、lgM类HLA抗体以及检测非补体依赖性的抗体 LOGO HERE 9 HLA抗体检测 3、ELISA方法 ELISA方法可根据包被抗原不同鉴定出HLA-Ⅰ和HLA-Ⅱ抗体 可测定补体依赖性HLA抗体和非补体依赖性HLA抗体 方法一 方法二 LOGO HERE 10 HLA抗体检测 4、Luminex检测技术 包被抗原的微球磁珠作为靶细胞 每种磁珠上包被一种抗原 多种磁珠可以在同一体系内反应 待测血清与磁珠孵育 微球磁珠荧光值大小 每种磁珠的反应特性 Luminex仪测定微球磁珠上的荧光值 判定HLA抗体的强度和特异性 存在HLA抗体时，形成抗原-抗体复合物 加入荧光标记的抗人lgG抗体 形成抗原-抗体-荧光标记抗体复合物 HLA包被的磁珠 受检者血清 荧光标记的 抗人lgG抗体 Luminex仪测定 荧光信号 荧光信号 可区分HLA-Ⅰ和HLA-Ⅱ抗体 反应体系可包含数种特异性抗原 LOGO HERE 11 HLA抗体血清学检测方法评价 补体依赖淋巴细 胞毒试验 ELISA 流式细胞术 Luminex检测技术 优点 最早应用于临床 操作简便、结果差异 较小，实验室常见方法 灵敏度高、能进行较为准确的定量 灵敏度高，特异性好，可进行抗体强度计算，实验室常见方法 缺点 灵敏度最低，易受多种因素影响，操作复