内容正文:
第4讲 新情境问题的思维建模与实验技能的系统归纳 (单元发展课)
一、科学思维——抽象、理性的学科情境要读懂
热点素材(一) dNTP与ddNTP
dNTP(脱氧核糖核苷三磷酸)是dATP、dGTP、dTTP、dCTP四种物质的统称,常在PCR中做原料。ddNTP是非天然的双脱氧核苷三磷酸,有ddATP、ddGTP、ddCTP、ddTTP 4种。DNA合成时,在DNA聚合酶作用下,若连接上的是双脱氧核苷酸,子链延伸终止;若连接上的是脱氧核苷酸,子链延伸继续。dNTP与ddNTP的结构如下图所示。
[深化理解]
(1) ATP、dATP和ddATP中“A”的结构是否都由腺嘌呤和脱氧核糖组成?试说明原因。
提示:否。ATP中的“A”由腺嘌呤和核糖组成,dATP中“A”由腺嘌呤和脱氧核糖组成,ddATP中“A”由腺嘌呤和双脱氧核糖组成。
(2) 以dNTP和ddNTP为原料、一种mRNA为模板是否可以合成多种长度的多肽链?试说明原因。
提示:是。以mRNA为模板合成DNA时,在相关酶的作用下,若连接上的是双脱氧核苷酸,子链延伸终止,若连接上的是脱氧核苷酸,子链延伸继续,因此,以dNTP和ddNTP为原料、一种mRNA为模板可以合成多种长度的DNA,进而合成多种长度的多肽链。
(3) dNTP作为PCR的原料时是否可为DNA复制提供能量?标记γ位的磷酸是否可使DNA带上标记?试说明原因。
提示:是。根据图示信息,可根据ATP特殊化学键断裂提供能量和DNA的组成,迁移得出结论,dNTP作为PCR的原料时,有两个特殊化学键断裂,故也可为DNA复制提供能量,γ位的磷酸是合成DNA所需的脱氧核苷酸的一部分,因此,标记γ位的磷酸可使DNA带上标记。
[预测导向训练]
1.脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)和双脱氧核苷三磷酸(ddNTP,ddN—Pα~Pβ~Pγ)的结构均与核苷三磷酸(NTP)类似,其中dNTP核糖的第2位碳原子上的羟基(—OH)被氢原子取代而ddNTP核糖第2位和第3位碳原子上的羟基均被氢原子取代。DNA复制时,ddNTP可以与dNTP竞争核苷酸链延长位点,并终止DNA片段的延伸。现有一些序列为5′—GCCTAAGATCGTA—3′的DNA分子单链片段,拟通过PCR获得被32P标记且以碱基“A”为末端(3′末端为碱基A)、不同长度的子链DNA。在反应管中加入单链模板、引物、底物、Taq DNA聚合酶、Mg2+及缓冲溶液。下列叙述正确的是( )
A.实验结束后最多可得到3种被32P标记的子链DNA
B.反应底物是dCTP、dGTP、dTTP和γ位32P标记的ddATP
C.ddNTP与dNTP竞争的延长位点是脱氧核苷酸链的5′末端
D.Taq DNA聚合酶在PCR中的作用是形成氢键和磷酸二酯键
解析:选A 分析题意可知,5′—GCCTAAGATCGTA—3′的DNA分子单链片段共有四个碱基“A”,内部有三个碱基“A”,因此利用PCR反应体系,最多可得到3种被32P标记的子链DNA,A正确;结合分析可知,反应底物是α位32P标记的dCTP、dGTP、dTTP和ddATP,B错误;DNA复制时,由5′端向3′端延伸,因此ddNTP与dNTP竞争的延长位点是脱氧核苷酸链的3′末端,C错误;Taq DNA聚合酶在PCR中的作用是形成磷酸二酯键,D错误。
2.[多选]下图为新型冠状病毒(RNA病毒)核酸检测的基本流程,采用的是“实时荧光定量RTRCR”技术,1~2 h内即可得到检测结果。其基本原理是DNA的复制过程中加入与特定模板链互补的荧光探针,这样每新合成一条DNA链,就会产生一个荧光分子,通过检测荧光信号即可确定是否为阳性。下列相关说法正确的是( )
A.①②过程都需要加入四种游离的脱氧核糖核苷酸作为原料
B.若只考虑一个DNA,其复制了n次,则整个过程中可以检测到2n+1-2个荧光信号
C.若样本RNA中A占碱基总数的20%,则其产生的DNA中C占碱基总数的30%
D.在核酸检测过程中出现假阳性,可能是外源DNA片段的污染
解析:选ABD ①为逆转录,②为复制,两者都是以脱氧核苷酸为原料合成DNA,因此①②过程都需要加入四种游离的脱氧核糖核苷酸作为原料,A正确;一个DNA分子复制n次,新形成了2n-1个DNA分子,共新产生2n+1-2个脱氧核苷酸链,由于每新合成一条DNA链,就会产生一个荧光分子,则共可以检测到2n+1-2个荧光信号,B正确;RNA为单链分子,由A含量无法推出C和G的含量,因此无法计算DNA中C占的比例,C错误;外源DNA片段的污染也可能会造成假阳性,D正确。
热点素材(二) CRISPR/Cas9技术
CRISPR/Cas9基因编辑技术可以按照人们的意愿精准剪切、改变任意靶基