2.3.3动物细胞融合技术与单克隆抗体课件2022-2023学年高二下学期生物苏教版选择性必修3

第2章 细胞工程 第3节 动物细胞工程 Part3 动物细胞融合技术与单克隆抗体 01 动物细胞融合技术 在一定的条件下将两个或多个动物细胞，通过物理、化学或生物方法，结合形成一个细胞的技术。 形成具有原来两个或多个细胞的遗传信息的杂交细胞 细胞膜的流动性 1、概念： 4、结果： 2、原理： 3、诱导方式 物理法：电融合法 化学法：聚乙二醇（PEG) 生物法：灭活病毒诱导法 与植物原生质体融合的方法相同 ——动物细胞融合特有 灭活的病毒粘附使细胞凝聚 细胞膜融合 细胞膜打开 细胞核融合 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 动物细胞融合实质及完成的标志：细胞核的融合 灭活病毒诱导细胞融合的原理 【拓展】 01 动物细胞融合技术 01 动物细胞融合技术 正在融合的淋巴细胞与骨髓瘤细胞 6、应用： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。 5、意义： 至今，种间、属间、科间，甚至动物和植物之间的细胞融合都已获得成功。 研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育 生物新品种等的重要手段。 为制造单克隆抗体开辟了新途径。 ① ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ 植物体细胞杂交技术 杂种细胞 去除细胞壁 原生质体融合 细胞壁再生 脱分化 再分化 移栽 杂种植株 植物组织培养 原生质体融合 （植物细胞的全能性） （细胞膜的流动性） 植物体细胞杂交技术完成的标志 植物体细胞杂交技术 具备两个亲本的遗传物质 项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 步骤 诱导方法 结果 意义 比较动物细胞融合与植物体细胞杂交 细胞膜的流动性和植物细胞的全能性 细胞膜的流动性 酶解法去掉细胞壁后，诱导原生质体融合，形成杂种体细胞，再经过植物组织培养形成杂种植株 分散成单个细胞后诱导细胞融合 物理方法、化学方法 物理方法、化学方法、灭活病毒 形成杂种植株 形成杂种细胞 克服远缘杂交不亲和障碍 02 单克隆抗体及其应用 1.定义：机体受抗原刺激后产生的，能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 2.抗体的分布： 1）血清（主要） 2）组织液及外分泌液（如乳汁中） 体液免疫 抗体 1）每个B淋巴细胞只分泌一种特异性的抗体 2）体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上 抗体 传统抗体制备方法及缺陷 不能无限增殖产生大量抗体 动物体内 抗原 刺激 多种浆细胞 多种抗体 筛选单一B细胞 增殖分化 抗原不纯 缺点： 产量低、纯度低，特异性差 二、单克隆抗体及其应用 体内产生的特异性抗体多达百万种 每一个浆细胞只能产生一种特异性抗体 如何获得大量的单一抗体? 单 克 隆 抗 体 如何获得大量、单一的抗体？ 体外培养时，一个B淋巴细胞不能无限增殖 1.需解决问题： 2.遗憾： 如何解决这一难题？ 一个B淋巴细胞 细胞群 抗体 克隆 二、单克隆抗体及其应用 因为能产生抗体的B淋巴细胞属于高度分化的细胞 １.我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的 思考.讨论 ２.有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和无限增殖能力同时具备 癌细胞 动物细胞融合 二、单克隆抗体及其应用 一个极富创造力的方案： 动物细胞融合 杂交细胞 动物细胞培养 单克隆抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 杂交瘤细胞 既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体 二、单克隆抗体及其应用 单克隆抗体技术手段： 动物细胞融合、动物细胞培养 细胞膜的流动性、细胞增殖 原理： 优点： 特异性强、灵敏度高、可大量制备 注射特定抗原 从患骨髓瘤的小鼠体内取骨髓瘤细胞的培养 多种B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 诱导融合 小鼠的脾脏中获取 2、单克隆抗体的制备过程 02 单克隆抗体及其应用 PEG融合法、 电融合法、 灭活病毒诱导法 能产生抗体，但不能大量增殖 不能产生抗体，但能大量增殖 2 杂交瘤细胞(多种) 1 3 置于选择性培养基上培养 第一次筛选 融合的细胞 BB 1 3 2 B B瘤 瘤瘤 瘤 √ 02 单克隆抗体及其应用 克隆化培养 抗体检测 第二次筛选 (抗原-抗体杂交技术) 能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 阳性细胞 杂交瘤细胞(多种) 每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞 96孔板 阳性孔 02 单克隆抗体及其应用 体外培养 体内或体外培养 能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 注射到小鼠腹腔 项目 体内培养 体外培养 优点 缺点 易于控制培养条件（如无需提供无菌环境等），操作简单，成本较低 规模小，产量少 可大规模培养，大量生产 需要人为控制培养条件，成本相对较高 02 单克隆抗体及其应用 体外培养