2023届高三生物二轮复习练习基因工程

专题　基因工程 1（2021年江苏）某小组为研究真菌基因m的功能，构建了融合表达蛋白M和tag标签的质粒。请结合实验流程回答下列问题。 （1）目的基因的扩增 ①提取真菌细胞 ，经逆转录获得cDNA,进一步获得基因m片段。 ②为了获得融合tag标签的蛋白M，设计引物P2时，不能包含基因m 终止密码子的编码序列，否则将导致 。 ③热启动PCR可提高扩增效率，方法之一是：先将除taq DNA聚合酶（Taq酶）以外的各成分混合后，加热到80℃以上再混入酶，然后直接从94℃开始PCR扩增。下列叙述正确的有 A. Taq酶最适催化温度范围为50-60℃ B. 与常规PCR相比，热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物。 C. 两条子链的合成一定都是5’端向3’端延伸。 D. PCR产物DNA碱基序列的特异性体现了Taq酶的特异性 （2）重组质粒的构建 ①将Smal切开的载体A与添加同源序列的m混合，用特定DNA酶处理形成黏性末端，然后降温以促进 ，形成A-m结合体。将A-m结合体导入大肠杆菌，利用大肠杆菌中的DNA聚合酶及 酶等，完成质粒的环化。 ②若正确构建的重组质粒A-m,仍能被Smal切开，则Smal的酶切点可能在 。 （3）融合蛋白的表达 ①用含有尿嘧啶的培养基培养URA3基因缺失型酵母，将其作为受体菌，导入质粒A-m,然后涂布于无尿嘧啶的培养基上，筛选获得的菌株，其机理是 。 ②若通过抗原-抗体杂交实验检测到酵母蛋白中含tag标签，说明 ，后续实验可借助tag标签进行蛋白M的分离纯化。 2. (2017·江苏卷)金属硫蛋白(MT)是一类广泛存在的金属结合蛋白,某研究小组计划通过多聚酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因,构建转基因工程菌,用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下,请回答下列问题: (1) 从高表达MT 蛋白的生物组织中提取mRNA,通过　　　　获得　　　　用于PCR扩增。  (2) 设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2),为方便构建重组质粒,在引物中需要增加适当的　　　　　　　　位点。设计引物时需要避免引物之间形成　　　　　　　　,而造成引物自连。  (3) 图中步骤1代表　　　　,步骤2代表退火,步骤3代表延伸,这三个步骤组成一轮循环。  (4) PCR扩增时,退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏　　　　　　的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关,长度相同但　　　　　的引物需要设定更高的退火温度。  (5) 如果PCR反应得不到任何扩增产物,则可以采取的改进措施有　　　　(填标号:① 升高退火温度　② 降低退火温度　③ 重新设计引物)。  3.(2019·江苏卷)下图1是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图,载体质粒P0具有四环素抗性基因(tetr)和氨苄青霉素抗性基因(ampr)。请回答下列问题: 图1 　 (1) EcoR Ⅴ酶切位点为 ,EcoR Ⅴ酶切出来的线性载体P1为　　　　末端。  (2) 用TaqDNA聚合酶进行PCR扩增获得的目的基因片段,其两端各自带有一个腺嘌呤脱氧核苷酸。载体P1用酶处理,在两端各添加了一个碱基为　　　　的脱氧核苷酸,形成P2;P2和目的基因片段在　　　　　酶作用下,形成重组质粒P3。  (3) 为筛选出含有重组质粒P3的菌落,采用含有不同抗生素的平板进行筛选,得到A、B、C三类菌落,其生长情况如下表(“+”代表生长,“-”代表不生长)。根据表中结果判断,应选择的菌落是　　　　(填表中字母)类,另外两类菌落质粒导入情况分别是　　　　　　　　、　　　　　　　　　　。  平板类型 菌落类型 A B C 无抗生素 + + + 氨苄青霉素 + + - 四环素 + - - 氨苄青霉素+四环素 + - - (4)为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒,拟设计引物进行PCR鉴定。图2为甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中的相应位置,PCR鉴定时应选择的一对引物是　　　　。某学生尝试用图中另外一对引物从某一菌落的质粒中扩增出了400 bp片段,原因是　。  图2 4.(2016·江苏卷)下表是几种限制酶识别序列及其切割位点,图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点,其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题: 限制酶 BamHⅠ BclⅠ Sau3AⅠ