2023届高三生物一轮复习：选择性必修三微生物的培养技术知识点

微生物的培养技术 一、培养基 1、概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 2、营养组成：一般都含有水、碳源（二氧化碳、糖类等）、氮源（尿素、牛肉膏、蛋白胨等）和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。 3、种类： ①按照物理性质可分为液体培养基（不加凝固剂）、半固体培养基（加凝固剂（如琼脂））和固体培养基（加凝固剂（如琼脂））。 ②按照化学成分可分为天然培养基（化学成分不明确）和合成培养基（培养基成分明确）。 ③按照功能可分为选择培养基（培养基中加入某些化学物质，依据微生物对某些物质的特殊需求或抗性，从众多微生物中分离所需的微生物）和鉴别培养基（培养基中加入某种指示剂或化学药品，通过产生特定的颜色或其他变化，鉴别不同种类的微生物）。 4、 培养不同微生物所需pH不同：细菌为6.5～7.5，放线菌为7.5～8.5，真菌为5.0～6.0。 5、 配制培养基要做到目的明确、营养协调、pH适宜。用高压蒸汽灭菌，冷却至50℃左右时倒平板操作。 二、无菌技术 1、含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法，以获得纯净培养物。 2、关键：防止外来杂菌的入侵。 3、常用方法：灭菌和消毒。 4、不同对象的无菌操作方法(连线) 5、消毒与灭菌区别 消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（对于一些不耐高温的液体）还有化学药剂（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒。适合用于操作空间、操作者的衣着和手等。 灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。适合用于接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等。 三、大肠杆菌的纯化培养 1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ①操作步骤→→→→ ②倒平板的方法及注意事项 a．请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。 b．甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。 c．丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。 2、纯化大肠杆菌的方法 ①纯化培养原理：想方设法在培养基上得到由一个细菌繁殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。 ②纯化大肠杆菌的关键步骤是接种。 ③常用的微生物接种方法有两种。 a．平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 b．稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 系列稀释操作(如图所示)： 涂布平板操作(如图所示)： 四、菌种的保存方法（绝氧、干燥、低温） ①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。 ②对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。 （1） 斜面保藏法（营养成分贫乏，氮源多，糖类少） （2） 液体石蜡油保藏法 （3） 干燥保藏法（砂土、滤纸条、无水硅胶、麸皮） （4） 冷冻干燥保藏法 （5） 真空干燥法 （6） 液氮超低温保藏法 （7）液相保藏法（蒸馏水、磷酸盐缓冲液） 五、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1、分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够在该培养基中生长的细菌就是能分解尿素的细菌。 2、鉴定原理：分解尿素的细菌合成的脲酶可以将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，在培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，则可确定该细菌可以分解尿素。 3、实验流程：土壤取样→制备培养基→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数 4、统计菌落数目 ①显微镜直接计数法—较实际值偏高 原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计数一定容积的样品中微生物的数量。 缺点：不能区分死菌与活菌 ②活菌计数法—较实际值偏低 原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 计算公式：每克样品中的菌株数=（C/V）M C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V：涂布平板时所用的稀释液的体积（mL） M：稀释倍数 学科网（北京）股份有限公司 $