2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体课件2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3

动物细胞工程 第2节 主要内容 动物细胞培养 动物体细胞核移植技术和克隆动物 动物细胞融合技术与单克隆抗体 动物细胞融合技术与单克隆抗体 动物细胞融合技术 一 1.概念：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。 2.结果：融合后形成的杂交细胞就有原来两个细胞的遗传信息。 3.原理：细胞膜具有一定的流动性。 4.诱导融合的常用方法： PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法。 什么是病毒的灭活？ 灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏病毒的抗原结构。 融合机理： 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 动物细胞融合技术 一 5.意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。 6.应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体。 动物细胞融合技术 一 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 细胞膜的流动性、植物细胞的全能性 细胞膜的流动性 融合前处理 用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁， 诱导原生质体融合 用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞 分散后诱导细胞融合 诱导融合的方法 物理法：电融合法、离心法 化学法：PEG、高Ca2+—高pH融合法 物理法（离心，振动，电激） 化学法：PEG 生物法：灭活的病毒 意义和用途 打破生殖隔离，获得杂种植株 突破有性杂交局限，使远缘杂交成为可能。获得杂交细胞，用于单克隆抗体制备 单克隆抗体技术及其应用 二 复习： 1.产生抗体的细胞： 2.合成抗体的原料： 3.合成抗体的场所： 4.抗体的分布： 血清（主要）、组织液及外分泌液 核糖体 氨基酸 浆细胞 单克隆抗体技术及其应用 二 缺陷： 产量低、纯度低， 且抗体的特异性差。 1.传统抗体制备方法及缺陷 单克隆抗体技术及其应用 二 动物细胞培养 单克隆抗体 杂交瘤细胞 既能迅速大量增殖， 又能产生专一抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 1975年，米尔斯坦和柯勒 1984年，诺贝尔生理学或医学奖 单克隆抗体技术及其应用 二 2.单克隆抗体： 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群， 这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 单克隆抗体技术及其应用 二 注射特定抗原 培养骨髓瘤细胞 多种B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合 多种杂交细胞 诱导融合 抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞 注射到腹腔 体外培养 用特定抗原对小鼠免疫，并从其脾中 获取能产生特定抗体的B淋巴细胞 用特定的选择培养基进行筛选：只有融合的杂交瘤细胞才能生长 多轮次的克隆化 培养和抗体检测 体外大规模培养或注 射到小鼠腹腔内增殖 从培养液或小鼠腹水中获得大量的单克隆抗体 杂交瘤细胞 （既能迅速大 量增殖，又能 产生抗体） 单克隆 抗体 检测原理：抗原和抗体能够特异性结合(分子水平的鉴定）。 单克隆抗体技术及其应用 二 3.单克隆抗体制备过程中的两次筛选： 第一次筛选：筛选出杂交瘤细胞。 第二次筛选：筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。 单克隆抗体技术及其应用 二 4.单克隆抗体的应用 讨论1.ADC的抗体和药物各具有什么作用？ 抗体主要发挥靶向运输作用，即通过特异性结合靶细胞表面的抗原，将连接的药物输送到靶细胞。药物发挥治疗效应，如杀伤靶细胞。 讨论2.除了细胞毒素，还有哪些物质理论上可以作为ADC偶联的药物？ 可用放射性同位素标记单克隆抗体进行靶向放疗。一些作用于细胞信号转导通路的药物可以通过阻断肿瘤细胞的信号通路来抑制其生长，理论上也可以将这些药物与单克隆抗体结合进行治疗。 思考·讨论 单克隆抗体的应用 抗体 接头 药物 单克隆抗体技术及其应用 二 4.单克隆抗体的应用 思考·讨论 单克隆抗体的应用 讨论3.单克隆抗体诊断试剂盒和ADC在临床应用上各具有什么优势？ ①单克隆抗体诊断试剂盒中的单克隆抗体只与特定的抗原反应，因此检测的特异性和灵敏度大大提高； ②生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可以传代培养、冷冻保存和复苏利用，有利于控制产品的质量和标准化生产诊断试剂盒； ②ADC能够协同发挥抗体特异性识别的靶向作用和细胞毒素对肿瘤细胞的杀伤作用，因此它在临床上具有靶点清楚、毒副作用小等优点 单克隆抗体技术及其应用