内容正文:
4.1 基因工程赋予生物新的遗传特性
从社会中来
番木瓜容易受番木瓜环斑病毒的侵袭。当番木瓜被这种病毒感染后,产量会大大下降。科学家通过精心设计,用“分子工具”培育出了转基因番木瓜,它可以抵御番木瓜环斑病毒。
DNA双螺旋的直径只有2nm,对如此微小的分子进行操作,是一项非常精细的工作,更需要专门的“分子工具”。那么,科学家究竟用到了哪些“分子工具”?这些“分子工具”各具有什么特征呢?
转基因番木瓜(左)与非转基因番木瓜(右)
工具
分子手术刀
分子缝合针
分子运输车
限制性内切核酸酶:
DNA连接酶:
载体:
准确切割DNA分子
将DNA片段连接起来
将体外重组好的DNA分子导入受体细胞
培育转基因番木瓜
“分子手术刀”
准确切割DNA分子
“分子缝合针”
“分子运输车”
将DNA片段连接起来
将体外重组好的DNA分子导入受体细胞
1.基因工程的概念:
指有意识地把一个人们所需的基因转入另一个生物体中,使后者获得新的遗传性状或表达所需要产物的技术。
(1)别名:
(2)原理:
(3)操作对象:
(4)操作水平:
(5)结果:
重组DNA技术
基因
分子水平
基因重组
赋予生物新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物制品
一、基因工程是在多个生物学分支学科的基础上发展而来
2.基因工程的诞生:
(5)1973年,科学家证明质粒可以作为基因工程的载体,构建重组DNA,使外源基因在原核细胞中成功表达,并实现物种间的基因交流。
(1)1944年,艾弗里等人通过肺炎链球菌的转化实验证明了DNA是遗传物质,还证明了DNA可以在同种生物的不同个体之间转移。
(2)1953年,沃森和克里克建立了DNA双螺旋结构模型。随后,克里克提出中心法则,阐明了遗传信息的传递和表达的机制。
(3)1961年,尼伦伯格和马太破译了第一个编码氨基酸的密码子。截至1966年,64个密码子均被破译成功。
(4)20世纪70年代初,多种限制酶、DNA连接酶和逆转录酶被相继发现,为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。
1.限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
(1)简称:
限制酶
(2)来源:
主要细菌等原核生物中分离纯化出来的。
(3)作用:
识别双链DNA上特定的一小段核苷酸序列,并催化其中特定的两个核苷酸之间的磷酸二酯键水解。
(4)作用部位:
特定部位的磷酸二酯键
A
T
C
G
T
A
G
C
5’
3’
5’
3’
磷酸二酯键
EcoRⅠ
5’…G-A-A-T-T-C…3’
3’…C-T-T-A-A-G…5’
SmaⅠ
5’…C-C-C-G-G-G…3’
3’…G-G-G-C-C-C…5’
二、对DNA进行剪切、连接和复制是实现重组DNA技术的基础
(5)识别序列
识别序列通常是4~8个核苷酸对,以6个核苷酸对最为常见
EcoRⅠ
5’…G-A-A-T-T-C…3’
3’…C-T-T-A-A-G…5’
SmaⅠ
5’…C-C-C-G-G-G…3’
3’…G-G-G-C-C-C…5’
BamHⅠ
5’…G-G-A-T-C-C…3’
3’…C-C-T-A-G-G…5’
TaqⅠ
5’……T-C-G-A……3’
3’……A-G-C-T……5’
限制酶所识别的序列的特点是:呈现碱基互补对称,无论是6个碱基还是4个碱基,都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的,称为回文序列。
(6)限制酶的命名:
用生物属名的头一个字母与种加词的头两个字母,组成了3个字母的略语,以此来表示这个酶是从哪种生物中分离出来的。例如,一种限制酶是从大肠杆菌( Escherichia coli)的R型菌株分离来的,就用字母EcoR表示;如果它是从大肠杆菌R型菌株中分离出来的第一种限制酶,则进一步表示成EcoRI。
(7)切割产物:
黏性末端或平末端
黏性末端
黏性末端
2023/6/14
实例1—EcoRⅠ限制酶:
识别序列为GAATTC,
切割部位为GA之间的磷酸二酯键。
实例2——SmaⅠ限制酶:
识别序列为CCCGGG
切割部位为CG之间的磷酸二酯键。
形成黏性末端
平末端
形成平末端
你能根据所掌握的知识,推测限制酶存在于原核生物中的主要作用是什么吗?试推测限制酶为什么不会切割自身的DNA?
原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵,所以它在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制。限制酶就是它的一种防御性工具。当外源DNA入侵时,它会利用限制酶来切割外源DNA,使之失效,以保证自身安全。所以,简单来说,限制酶在原核生物中起到的作用为:切割外源DNA、使之失效,以保证自身安全
原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已被修饰