1.2纯净的目标微生物可通过 课件2022-2023学年高二下学期生物浙科版选择性必修3

第二节 纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得 如何从混杂的微生物中分离得到纯种的目标微生物？ 分离得到的纯种微生物的数量又如何去测定？ 平板划线法、稀释涂布平板法 由不同微生物个体繁殖后代组成的大片菌落 单菌落：由一个细胞分裂形成的、肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞集团 ? 稀释涂布平板法和显微镜计数法（需用到血细胞计数板） 一、采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化 （一）平板划线法 连续平行划线和扇形划线 1.操作要点 注意： （1）无论是何种划线法，蘸取菌种前和划线后，接种环都要灼烧灭菌。 （2）无论是何种划线法，菌种只蘸取一次。 平板划线操作中三种灼烧的目的不同 1.蘸取菌液前灼烧 2.每次划线前灼烧 3.划线操作结束后灼烧 避免接种环上可能存在的微生物污染菌种。 杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端。 及时杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者。 思考： 连续平行划线法，单菌落一般出现在划线的什么位置？ （二）稀释涂布法 1.操作要点 梯度稀释和涂布平板 （1）样品梯度稀释 在火焰旁称取土壤10g，加入90ml无菌水中，摇匀，制成稀释10倍的土壤菌液。 分别取1ml上清液，加入盛有9ml无菌水的试管中，制成不同稀释倍数的菌液。 取6支试管，分别加入9ml无菌水。 1ⅹ107 1ⅹ105 1ⅹ106 1ⅹ103 1ⅹ102 1ⅹ104 9mL无菌水 1ⅹ10 90mL无菌水 10g （2）取样涂布平板 ①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 1ⅹ107 1ⅹ105 1ⅹ106 1ⅹ103 1ⅹ102 1ⅹ104 ②取0.1mL菌液，滴加到培养基表面 ③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8-10s。 ④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀 （二）稀释涂布法 1.操作要点 注意： 1.每次稀释都要换一支吸管 2.分离得到单菌落一般以培养皿中有20个以内菌落为宜。 3.计算微生物数量一般以培养皿中有30～300个菌落为宜。 梯度稀释和涂布平板 平板划线法 稀释涂布法 工具 原理 特点 结果 相同点 平板划线法和稀释涂布法比较 接种环 涂布器（或玻璃刮刀） 在数次划线后培养，可以分离到有一个细菌细胞繁殖而来的，肉眼可见的细胞群体，即菌落。 在稀释足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细菌细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落 方法简单，但不适宜计数 单菌落更易分开，可以计数，但操作复杂。 使培养基上形成由单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落 讨论 1.判断液体培养基中成功接种酵母菌的依据是什么？ 否。①挑取单菌落接入糖水中,培养一段时间检查是否能产生酒味 ②接入面团中观察能否发面; ③挑取菌落样品，制作临时装片，在显微镜下观察、识别 与未接种的培养基相比，接种的培养基由于酵母菌的增殖而变浑浊。 与用酵母菌纯种在固体培养基表面接种的结果相比，用样品稀释液接种的固体培养基表面出现特征相同的、最小菌落即认为可能是分离出了酵母菌单菌落。 若出现，可能是在接种过程中有杂菌污染 2.如何判断是否分离出酵母菌的单菌落？判断依据是什么？ 4.仅从菌落特征是否能够认定你分离出了酵母菌？怎样进行进一步的鉴定？ 3.在固体培养基表面涂布的菌种是否出现形态、颜色不同的单菌落？你认为出现该现象的原因是什么？ 活动：接种、培养并分离酵母菌 问：以上两张图分别是平板划线法和稀释涂布平板法培养细菌的结果。如果要对菌落进行计数，则哪种方法可行？为什么？得到的细菌数量是确切的细菌数量吗？ 1.间接计数法——稀释涂布平板法 （1）原理 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 空白对照 二、稀释涂布平板法和显微镜计数法可测定微生物的数量 ①一般选择菌落数为30～300的平板计数。 ②在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。 ③适当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。 （2）计数原则 （3）结果分析 ①统计的菌落数往往比活菌的实际数目少； ②统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。 原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 （4）计算公式 每g样品中的菌落数＝(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；M代表稀释倍数。 无法计数 159 17 2 0 无法计数 141 13 1 0 无法计数 150