2.3土壤中分解纤维素细菌的分离 课件-2023-2024学年上学期高中生物选择性必修1

【基础强化】 1、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 （1）分离原理：土壤中的细菌能分解尿素，是因为它们能合成 ，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到 作用。 （2）统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用 法。 （3）实验流程：土壤取样→ →微生物的培养与观察→细菌的 。 2、分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解产生氮气（ ） 3、在尿素培养基上长出的菌落一定是尿素分解菌（ ） 脲酶 催化 稀释涂布平板法 样品稀释 计数 × 还可能是固氮菌 × 4、尿素为分解尿素的细菌提供碳源（ ） 5、培养基中加入尿素为唯一氮源的原因是只有尿素分解菌能分解尿素为生命活动供能（ ） 6、尿素分解菌的代谢类型是自养需氧型，所以实验中需要振荡培养，为其提供更多的氧气（ ） 7、涂布平板操作时，用涂布器直接沾取菌夜均匀涂布在培养基表面（ ） 8、计数时，在同一稀释度下，任取3个平板对其中的菌落数进行统计，取其均值即可（ ） × × × ①不同平板间差异不大②菌落数量在30~300之间 尿素只是氮源不是能源 尿素分解菌的代谢类型是异养需氧型 × × 雯姐高中生物 选修一 第二章 第二节 2.3 土壤中纤维素分解菌的分离 如何从土壤中分离分解纤维素的微生物？ 1、纤维素：一种葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，可以作为微生物分解菌的碳源。 （一）纤维素和纤维素酶 ①元素组成：只含C H O ②类别：多糖、非还原性糖 ③分布：棉花是自然界中纤维素含量最高的 天然产物，此外，木材、作物秸秆等也富含 纤维素。 纤维素酶： ①土壤中某些微生物能够产生纤维素酶,把纤维素分解为葡萄糖后再利用。 ②纤维素酶是一种________，至少包括_______、______和_____________，具有催化作用。 （一）纤维素和纤维素酶 葡萄糖苷酶 复合酶 C1酶 CX酶 （二）：实验 土壤取样 选择培养 梯度稀释 鉴别培养 涂布平板 ①取样条件： 富含纤维素的环境， ②取样部位：距地表约3～8cm的土壤层。 把滤纸埋在土壤经过30d左右，再选择已腐烂的滤纸作为样品。 林中多年落叶的腐殖质土作为样品。 林中积累的枯枝败叶作为样品。p28 【拓展】除自然环境中存在分解纤维素的微 生物外，在草食性动物等的消化道内，也共 生有分解纤维素的微生物，其原理也是产生 纤维素酶而分解纤维素，而人没有分解纤维 素的能力。 土壤取样 选择培养 梯度稀释 鉴别培养 涂布平板 ①选择培养基 以纤维素作为主要碳源的液体培养基 增加纤维素分解菌的浓度（浓缩/扩大培养）确保能够从样品中分离到所需要的目的菌。 （二）：实验 土壤取样 选择培养 梯度稀释 鉴别培养 涂布平板 （二）：实验 ②在摇床上振荡反应1h 利于微生物与培养液充分接触，提高营养物质利用率； 增加溶解氧含量。若没有摇床，可以采用人工振荡的方法。p27 保持菌体悬浮生长，避免菌体沉降死亡 厌氧菌也可悬浮培养 刚果红（染料） + 纤维素 红色复合物 刚果红染色法 ①鉴别原理： 纤维素酶 纤维素分解菌 红色复合物消失 ②鉴别结果： 培养基上出现以纤维素分解菌为中心的透明圈 鉴别培养 刚果红染色法 方法一：先培养微生物再加入刚果红进行颜色反应。 操作步骤：培养基经涂布培养长出菌落→覆盖1mg/mL的CR溶液→(10～15min后)倒去CR溶液→加1mol/L的NaCl溶液→15min后倒掉NaCl溶液→出现透明圈 NaCl溶液作用：洗去未结合或结合不牢的刚果红染液，使透明圈更清晰。 方法二：在倒平板时就加入刚果红。 操作步骤：配置10mg/mL的CR溶液→灭菌→按照1mLCR溶液/200mL培养基的比例混匀→倒平板→接种后培养→出现透明圈。 【分析】这两种方法各有什么优劣？ 12 刚果红染色法 方法一：先培养微生物再加入刚果红进行颜色反应。 方法二：在倒平板时就加入刚果红。 1、优点：显示出的颜色基本上是纤维素分解菌的作用（结果准确）。 2、缺点：操作繁琐，加入刚果红会使菌落之间发生混杂。 1、优点：操作简便，不存在菌落的混杂问题。 2、缺点：可能出现假阳性反应 产生淀粉酶的微生物： 产生的透明圈模糊，易于区分 能降解色素的微生物： 产生的透明圈明显，不易区分 刚果红也可以和淀粉结合 13 土壤取样 选择培养 梯度稀释 鉴别培养 涂布平板 （二）：实验 挑取菌落 挑选产生明显透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C－ 370C培养，进一步纯化培养。 例：固体培养基中难溶性磷酸盐在菌株Q的作用下溶解，会在菌落周围形成透明圈(图4)，透明圈直径(D)与菌落直径