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课时跟踪练(47) 基因工程的基本工具与操作程序
一、选择题
1.如图表示由不同的限制酶切割而成的DNA末端及相关的酶作用位点。下列有关叙述错误的是( )
A.甲、乙、丙都属于黏性末端
B.甲、乙片段可形成重组DNA分子,但甲、丙不能
C.DNA连接酶的作用位点在图乙中b处
D.切割甲的限制酶不能识别由甲、乙片段形成的重组DNA分子
C 解析:由图可知,甲、乙、丙都属于黏性末端,A正确;甲、乙的黏性末端相同,因此可在DNA连接酶的作用下形成重组DNA分子,但甲、丙的黏性末端不同,它们之间不能形成重组DNA分子,B正确;DNA连接酶将两个DNA片段连接为一个DNA分子,作用部位是磷酸二酯键,C错误;切割甲的限制酶的识别序列为GAATTC∥CTTAAG,而甲、乙片段形成的重组DNA分子序列为GAATTG∥CTTAAC,因此切割甲的限制酶不能识别由甲、乙片段形成的重组DNA分子,D正确。
2.下列关于“DNA的粗提取与鉴定”及“DNA片段的扩增与电泳鉴定”的叙述,正确的是( )
A.用同样的方法从等体积猪血和鸡血中提取的DNA量相近
B.使用二苯胺试剂能有效测定不同提取液中DNA的纯度差别
C.PCR扩增的DNA片段在琼脂糖凝胶中迁移的速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小等有关
D.PCR扩增4次循环后,得到的含有一种引物的DNA片段所占比例为7/8
C 解析:猪是哺乳动物,哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核,不含DNA,因此用同样的方法从等体积猪血和鸡血中提取的DNA量不相近,A错误;DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色,二苯胺试剂只能鉴定DNA的有无,不能测定DNA的纯度,B错误;PCR扩增的DNA片段在琼脂糖凝胶中迁移的速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小等有关,C正确;PCR扩增4次即DNA复制4次,共形成16个DNA,根据DNA半保留复制的原理可知,有2个子代DNA含有其中一种引物,14个子代DNA同时含有两种引物,因此含有一种引物的DNA占2/16=1/8,D错误。
3.(2023·山东泰安模拟)限制酶的发现为DNA的切割和功能基因的获得创造了条件。限制酶Sau3A Ⅰ 、EcoR Ⅰ 、BamH Ⅰ 的识别序列及切割位点分别为↓GATC、G↓AATTC、C↓GATCC。含某目的基因的DNA片段如图所示,若利用质粒A(含限制酶Sau3A Ⅰ 、EcoR Ⅰ 、BamH Ⅰ 的酶切位点各1个)构建基因表达载体,为克服目的基因和质粒A的自身环化以及目的基因与质粒的任意连接等,应该如何选择限制酶( )
A.用限制酶EcoR Ⅰ 或BamH Ⅰ 处理含某目的基因的DNA和质粒A
B.用限制酶Sau3A Ⅰ 和BamH Ⅰ 处理含某目的基因的DNA和质粒A
C.用限制酶Sau3A Ⅰ 和EcoR Ⅰ 处理含某目的基因的DNA和质粒A
D.用限制酶EcoR Ⅰ 和BamH Ⅰ 处理含某目的基因的DNA和质粒A
D 解析:用限制酶Sau3A Ⅰ 切割目的基因会破坏目的基因,且为了防止目的基因和质粒自身环化等,需要使用不同种限制酶进行切割,所以应使用限制酶EcoR Ⅰ 和BamH Ⅰ 去切割质粒和目的基因。故选D。
4.若要利用某目的基因(如图甲)和P1噬菌体载体(如图乙)构建重组DNA(如图丙),限制性内切核酸酶的酶切位点分别是Bgl Ⅱ (A↓GATCT)、EcoR Ⅰ (G↓AATTC)和Sau3A Ⅰ (↓GATC)。下列分析合理的是( )
A.用EcoR Ⅰ 切割目的基因和P1噬菌体载体
B.用Bgl Ⅱ 和EcoR Ⅰ 切割目的基因和P1噬菌体载体
C.用Bgl Ⅱ 和Sau3A Ⅰ 切割目的基因和P1噬菌体载体
D.用EcoR Ⅰ 和Sau3A Ⅰ 切割目的基因和P1噬菌体载体
D 解析:用EcoR Ⅰ 和Sau3A Ⅰ 切割目的基因和P1噬菌体载体,构建的重组DNA中RNA聚合酶在插入的目的基因上的移动方向与图丙相同。故选D。
5.利用PCR技术扩增目的基因,其原理与细胞内DNA复制类似(如图所示)。图中引物为单链DNA片段,它是子链合成延伸的基础。下列叙述错误的是( )
A.用PCR方法扩增目的基因时无须知道基因的全部序列
B.设计引物时需要避免引物之间形成碱基互补配对而造成引物自连
C.复性温度过高可能导致PCR反应得不到任何扩增产物
D.第四轮循环产物中同时含有引物A和引物B的DNA片段所占的比例为15/16
D 解析:用PCR方法扩增目的基因时,要有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便根据这一序列合成(两种)引物,但无须知道基因的全部序列,A正确;PCR过程中需要两种引物,不同的引物能靠碱基互补配对形成(部分)双链,从而造成引物不能与模板DNA结合,故设计引物时需要避免引物之间形成碱基互补配对而造成引物自连,B正确