3.2基因工程的基本操作程序第3课时课件2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3

第三章 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 1 01 DNA片段的扩增及电泳鉴定 1、DNA体外扩增的原理 ① PCR利用了DNA热变性的原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合 ② PCR仪实质上就是一台能够自动调控温度的仪器，一次PCR一般要经历30次循环 2、DNA片段电泳鉴定的原理 ① DNA分子具有可解离的基团，在一定的PH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳 ② 在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构像等有关 ③ 凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来 3、材料仪器 PCR仪 微量离心管 微量移液器 电泳装置 4、实验材料 4种脱氧核苷酸的等量混合液、2种引物 耐高温的DNA聚合酶、模板DNA 扩增缓冲液、无菌水 电泳缓冲液、凝胶载样缓冲液 琼脂糖、核酸染料等 PCR反应体系的配方 10倍浓缩的扩增缓冲液 5ul 20mmol/l 的4种脱氧核苷酸的等量混合液 1ul 20umol/l 的引物I 2.5ul 20umol/l 的引物II 2.5ul H2O 28-33ul 1-5U/ul 的Taq DNA聚合酶 1-2U 模板DNA 5-10ul 总体积 50ul 5、实验步骤 加样 离心 扩增 配置琼脂糖溶液 制备凝胶 电泳加样 电泳、观察 6、注意事项 ① PCR实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌处理 ② 缓冲液和酶使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上缓慢融化 ③ 在向微量离心管中添加反应组分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换 ④ 在进行操作时，一定要戴好一次性手套 ⑤ PCR扩增不能随意加大试剂用量 你是否成功扩增出DNA片段？判断的依据是什么？ 可以在紫外灯下直接观察到DNA条带的分布及粗细程度来评价扩增的结果。进行电泳鉴定的结果应该是一条条带，该片段大小约为750bp 你进行电泳鉴定的结果是几条条带？如果不止一条条带，请分析产生这个结果的可能原因？ 如果扩增不成功，可能的原因有：漏加了PCR的反应成分，各反应成分的用量不当，PCR程序设置不当等。如果扩增结果不止一条条带，可能的原因有：引物设计不合理，它们与非目的序列有同源性或容易形成二聚体；退火温度过低；DNA聚合酶的质量不好等 课后作业： 1、记背相关知识点 2、课时练大本 3、课时练小本 $