内容正文:
第三章 基因的本质
第1节 DNA是主要的遗传物质
多糖类的荚膜
四、噬菌体侵染大肠杆菌的实验
虽然艾弗里的实验引起了人们的注意,但是,由于艾弗里实验中提取出的DNA,纯度最高时也还有0.02%的蛋白质,因此,仍有人对实验结论表示怀疑。另外,当时科学界普遍认为蛋白质是遗传物质。
如何获取单独的DNA或者蛋白质进行实验?有没有比细菌更为简单的实验材料?
1952年,赫尔希和蔡斯以T2噬菌体为实验材料,利用放射性同位素标记的新技术,完成了另一个更具有说服力的实验。
T2噬菌体
赫尔希和蔡斯
1969年诺贝尔生理学或医学奖
T2噬菌体
(细菌病毒,专一寄生于大肠杆菌)
大肠杆菌
选择T2噬菌体为实验材料的原因:
①结构简单,成分只有蛋白质和DNA
③繁殖时仅将遗传物质导入大肠杆菌,繁殖快
1. 实验者:
赫尔希和蔡斯
2. 实验材料:
T2噬菌体 大肠杆菌
四、噬菌体侵染大肠杆菌的实验
侵入其它细菌
增殖场所在大肠杆菌细胞内,T2噬菌体只提供遗传物质(DNA)作为模板,增殖需要的原料:脱氧核苷酸、氨基酸、ATP、酶等均由大肠杆菌提供。
注入
复制、合成
组装
释放
3.T2噬菌体病毒侵染细菌的过程:
→
→
→
→
思考:T2噬菌体增殖的场所是哪里?增殖所需原料有哪些?由谁提供?
吸附
四、噬菌体侵染大肠杆菌的实验
哪一种物质进入了大肠杆菌体内?
DNA和蛋白质不能直接看到,怎么办?
放射性分别标记DNA和蛋白质
选择什么元素进行放射性标记
主要组成元素
C、H、O、N、P
主要组成元素
C、H、O、N、S
同位素标记法
32P标记的噬菌体
35S标记的噬菌体
思考:
用14C和18O等标记行吗?
四、噬菌体侵染大肠杆菌的实验
4、实验方法:
放射性同位素标记
(直接单独观察各自的作用)
四、噬菌体侵染大肠杆菌的实验-①培养带标记的噬菌体
5、实验过程:
思考-如何让噬菌体带上标记呢?
不可以,噬菌体是病毒,无法单独在培养基上存活,应用含被标记的大肠杆菌培养基培养噬菌体。
能否在含放射性同位素的培养基中标记噬菌体
+
培养
培养
35S标记的 _______
32P标记的 _______
T2噬菌体
T2噬菌体
T2噬
菌
体
+
培养
含32P的
_________
大肠杆菌
含32P的细菌培养基
大肠杆菌
含35S的
_________
大肠杆菌
含35S的细菌培养基
+
培养
大肠杆菌
甲组
乙组
四、噬菌体侵染大肠杆菌的实验-②标记的噬菌体侵染细菌
标记的T2噬菌体
侵染大肠杆菌
搅拌
离心并检测放射性
检测子代噬菌体的放射性
短时间保温
无放射性标记的细菌
使吸附在细菌上的噬菌体与细菌分离
使噬菌体的蛋白质外壳与大肠杆菌分层
让上清液中析出重量较轻的噬菌体颗粒,沉淀物中留下被侵染的大肠杆菌。
标记细菌→标记噬菌体→噬菌体侵染细菌→搅拌、离心→观察放射性分布
5、实验过程:
使噬菌体侵染大肠杆菌
四、噬菌体侵染大肠杆菌的实验
35S标记的噬菌体
上清液放射性很高
沉淀物放射性很低
子代噬菌体中无35S
甲组
说明:T2噬菌体中的蛋白质没有进入细菌
用35S标记的噬菌体侵染大肠杆菌时,发现沉淀物中也有少量放射性,可能原因?
搅拌不充分,有少量含35S的噬菌体蛋白质外壳吸附在细菌表面,随细菌离心到沉淀物中。
6、实验结果:
用35S标记的噬菌体与大肠杆菌混合
经短时间保温后用搅拌器搅拌
离心检测上清液和
沉淀物中的放射性物质
细菌裂解后检测子代噬菌体的放射性
不能证明蛋白质不是遗传物质。
四、噬菌体侵染大肠杆菌的实验
用32P标记的噬菌体侵染大肠杆菌时,发现上清液中放射性也较高,可能原因?
(1)保温时间过短,部分噬菌体没有侵染到大肠杆菌细胞内;
(2)保温时间过长,噬菌体在大肠杆菌内增殖后释放出子代。
32P标记的噬菌体
上清液放射性很低
沉淀物放射性很高
子代噬菌体中含有32P
乙组
说明侵入大肠杆菌的遗传物质是DNA
6. 实验结果:
用35S标记的噬菌体与大肠杆菌混合
经短时间保温后用搅拌器搅拌
离心检测上清液和
沉淀物中的放射性物质
细菌裂解后检测子代噬菌体的放射性
四、噬菌体侵染大肠杆菌的实验
6. 实验结果:
①噬菌体侵染细菌时, 进入细菌的细胞中,而 仍留在细胞外。
②子代噬菌体的各种性状是通过 遗传的。
7. 实验结论:
才是噬菌体的遗传物质。
DNA
蛋白质外壳
亲代的DNA
DNA
补充:不能证明蛋白质不是遗传物质,因为蛋白质没有进入细菌。
要证明蛋白质不是遗传物质还要做一个对比实验,即让蛋白质进入细菌而DNA留在外面
四、噬菌体侵染大肠杆菌的实验
(2)实验过程中,两次涉及大肠杆菌,这两次涉及的