3.1DNA的粗提取和鉴定课件2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3

DNA的粗提取与鉴定 1 一、基础知识 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质上的差异，提取DNA，去除其他成分。 2、细胞中除了DNA，还有哪些生物大分子？ 1、DNA分子存在于细胞中的哪些结构呢？ 真核细胞：细胞核（染色体）、线粒体、叶绿体 原核细胞：拟核、质粒 3、如何去除其他成分，提取DNA？ RNA、蛋白质、脂质、糖类等 2 （1）DNA不溶于酒精溶液 DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 二、实验原理 （2）DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 1、DNA粗提取原理 DNA在 2 mol/L 的NaCI溶液中溶解度 较大 在 0.14mol/L 的NaCI溶液中溶解度 较小 ——初步分离DNA与蛋白质 ——溶解DNA 3 2、DNA的鉴定原理 DNA + 二苯胺试剂 沸水浴 蓝色 现配现用 二、实验原理 使用时： 注意安全 4 三、材料用具 不同生物的组织中DNA含量不同。在选取材料时，你认为应该遵循什么原则？ 实验材料的选取 DNA含量高、材料易得、便于提取 你认为如下提供的材料中是否都适合提取DNA？为什么？ ❌ 洋葱 香蕉 猪肝 鸡血 菠菜 猪血 5 （21年天津卷）孟德尔说：“任何实验的价值和效用，决定于所使用材料对于实验目的适合性”．下面实验材料的选择不合适的是（　　） A．用洋葱的鳞片叶表皮观察细胞的质壁分离和复原现象 B．用洋葱根尖分生区观察细胞有丝分裂 C．用洋葱鳞片叶提取和分离叶绿体中的色素 D．用洋葱鳞片叶粗提取DNA C 四、实验步骤：提取DNA 步骤一：研磨 破碎细胞，获取DNA 研磨液成分 作用 SDS 使蛋白质变性 EDTA 抑制DNA酶 Tris-HCl缓冲液 稳定DNA ①研磨时间不宜太长，也不宜太用力 ②可以加入适量的纤维素酶、果胶酶 ③若用植物叶片当实验材料，为了出去细胞中的糖，可事先黑暗处理 注意事项： 7 步骤二： 四、实验步骤：提取DNA 过滤 3、实验收集的是滤液还是沉淀呢？ 滤液 2、实验用什么材料过滤还是用滤纸？纱布？ 纱布，为了减少DNA的损失 1、低温放置几分钟的作用？ 抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解； 4.粗提取的DNA中可能会含有哪些杂质？ 核蛋白、多糖、RNA等杂质 8 向滤液中加入等体积的（95%）预冷酒精溶液，静置2-3min，用玻璃棒沿着同一方向缓慢搅拌，卷起白色丝状物。 步骤三：析出DNA 四、实验步骤：提取DNA 问题2：若提取物不是白色丝状物，可能原因是什么？ 问题1：为什么沿着同一方向缓慢搅拌？ 防止DNA断裂。 含较多杂质 实验中出现的丝状物的主要成分是 DNA ，实际上每一根“丝”都是由许多 DNA 分子聚集在一起形成的。 9 材料的获取与研磨 析出DNA 收集滤液 四、实验步骤：提取DNA 10 1号试管 2号试管 丝状物(DNA) 用玻璃棒搅拌 加入二苯胺试剂 沸水浴 冷却后，观察现象 不变蓝 变蓝 四、实验步骤：DNA的鉴定 不加入 加入 加入2mol/L NaCl溶液 2mL 2mL 2mL 5min 丝状物溶解 5min 2mL 无 若实验组颜色不变蓝，可能原因是？ ①实验材料的选取失误 ②材料中的核DNA没有充分释放，如研磨不充分或收集的滤液的量过少 ③加入酒精后摇动或搅拌过猛，DNA被破坏 11 如果实验材料是鸡血细胞，获取DNA滤液的方法一样吗？ 用蒸馏水破碎细胞，因为血细胞在蒸馏水中大量吸水涨破 12 C 下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验叙述，错误的是(　　) A.酵母和菜花均可作为提取DNA的材料 B.DNA既溶于2 mol/L NaCl溶液也溶于蒸馏水 C.向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌，可见玻棒上有白色絮状物 D.DNA溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热，冷却后变蓝 c (2021山东高考)粗提取 DNA 时，向鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水并搅拌，过滤后所得滤液进行下列处理后再进行过滤，在得到的滤液中加入特定试剂后容易提取出 DNA相对含量较高的白色丝状物的处理方式是（ ） A. 加入适量的木瓜蛋白酶 B. 37～40℃的水浴箱中保温 10～15 分钟 C. 加入与滤液体积相等的、体积分数为 95%的冷却的酒精 D. 加入 NaCl 调节浓度至 2mol/L→过滤→调节滤液中 NaCl 浓度至 0．14mol/L A Lavf58.20.100 $