内容正文:
第1讲 基因工程的基本工具和操作过程
知识体系——定内容
核心素养——定能力
生命观念
运用结构与功能观,理解基因工程的原理和技术。
科学思维
从基因工程诞生的历程中,体会科学发展的曲折性和必然性。
科学探究
通过调查不同种群的种群密度,培养科学探究的能力。
考点1 种群的数量特征
1.基因工程的概念
(1)手段:按照 人们的愿望 ,通过 转基因 等技术,赋予生物新的遗传特性。
(2)目的:创造出更符合人5们需要的新的 生物类型 和 生物产品 。
(3)水平: 分子 水平。
(4)基础: 生物化学 、分子生物学和 微生物学 等学科。
2.基因工程的基本工具
(1) 限制性内切核酸酶 ——“分子手术刀”
(2)DNA连接酶——“分子缝合针”
(3)基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
①作用:将 外源基因 送入受体细胞中。
②种类: 质粒 、噬菌体和 动植物病毒 等。
③条件:
a.具有一个至多个 限制酶切割位点 ,供外源DNA插入其中。
b.能在受体细胞中进行 自我复制 ,或整合到受体DNA上,随受体DNA 同步复制 。
c.具有 标记基因 ,便于重组DNA分子的筛选。
1.切割质粒的限制性内切核酸酶均能特异性地识别6个核苷酸序列。(×)
2.限制酶也可以识别和切割RNA。(×)
3.DNA连接酶能将两碱基通过氢键连接起来。(×)
4.E.coli DNA连接酶既可连接平末端,又可连接黏性末端。(×)
5.载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选的标记基因。(×)
1.(选择性必修3P74“拓展应用1”)限制酶为什么不切割细菌本身的DNA分子?
答案:因为含有某种限制酶的细胞的DNA分子或者不具备这种限制酶的识别序列,或者通过甲基化酶将甲基转移到了限制酶所识别序列的碱基上,使限制酶不能将其切开。
2.(选择性必修3P74“正文信息拓展”)天然的DNA分子是否可以直接用做基因工程载体?为什么?
答案:不可以。具有能自我复制、有一个或多个限制酶切割位点、有标记基因及对受体细胞无害等特点的DNA分子才可以直接用作基因工程的载体。实际上天然的DNA分子一般不完全具备上述条件,往往需要进行人工改造后才能用于基因工程操作。
1.基因工程的理论基础
2.与DNA有关的几种酶的比较
3.标记基因的作用
标记基因可用于检测目的基因是否导入受体细胞:
(情景探究)如图表示目的基因两侧和载体上的限制酶切割位点,据图分析:
(1)如图选择限制酶时,选择Pst Ⅰ,而不选择Sma Ⅰ的原因是什么?
答案:选择限制酶时,不能选择酶切位点位于目的基因内部或标记基因内部的限制酶。
(2)为了避免目的基因和质粒自身环化、反向连接,应该如何选择限制酶?
答案:选择Pst Ⅰ和EcoR Ⅰ两种限制酶。
(3)切割目的基因和质粒的限制酶是否一定为同一种限制酶?
答案:不一定,只要切出的粘性末端相同即可。
◆[提升点1] 理解能力
1.如图是3种限制酶对DNA分子的识别序列和剪切位点图(箭头表示切点,切出的断面为黏性末端)。下列叙述错误的是( )
A.不同的限制酶有不同的识别序列和切割位点,体现了酶的专一性
B.限制酶2和3识别的序列都包含6个核苷酸
C.限制酶1和3剪出的黏性末端相同
D.能够识别和切割RNA分子内一小段核苷酸序列的酶只有限制酶2
解析:D [不同的限制酶有不同的识别序列和切割位点体现了酶具有专一性,A正确;据图可知,限制酶2和3识别的序列分别是CCGCGG和GGATCC,均为6个核苷酸,B正确;限制酶1和3剪出的黏性末端相同,均为GATC,C正确;限制酶只能识别特定的DNA序列,因此三种限制酶均不能识别和切割RNA中核糖核苷酸序列,D错误。]
2.用Xho Ⅰ和Sal Ⅰ两种限制性内切核酸酶分别处理同一DNA片段,酶切位点及酶切产物分离结果如图。以下叙述不正确 的是( )
A.如图中两种酶识别的核苷酸序列不同
B.如图中酶切产物可用于构建重组DNA
C.泳道①中是用Sal Ⅰ处理得到的酶切产物
D.图中被酶切的DNA片段是单链DNA
解析:D [限制酶识别特定的脱氧核苷酸序列,不同的限制酶能识别不同的核苷酸序列,由电泳图可知Xho Ⅰ和Sal Ⅰ两种酶分别切割时,识别的序列不同,A正确;同种限制酶切割出的DNA片段,具有相同的黏性末端,再用DNA连接酶进行连接,可以构成重组DNA,B正确;Sal Ⅰ将DNA片段切成4段,Xho Ⅰ将DNA片段切成3段,根据电泳结果可知泳道①为Sal Ⅰ,泳道②为Xho Ⅰ,C正确;限制酶切割双链DNA,酶切后的DNA片段仍然是双链DNA,D错误,所以选D。]
3.下列与生物工程中有关的酶的说法,正确的是( )
A.胰蛋白酶和胃蛋白酶都能用于制备细胞悬液
B.限制性内切核