内容正文:
2.2动物细胞工程(2)
动物细胞融合技术
与单克隆抗体
旁栏思考题P49
19世纪30年代,科学家曾在患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中观察到多核细胞。如何解释这一现象?
【答案】病人体内的病毒等诱导多个体细胞融合形成了多核细胞。
一.动物细胞融合技术
1970年,有两位科学家做了一个著名的实验:人—鼠细胞融合的实验。
融合细胞
细胞
融合
37℃
40min
正在融合的细胞
红色荧光染料标记膜蛋白
绿色荧光染料标记膜蛋白
人细胞
小鼠细胞
1970年,细胞融合实验
融合成单核细胞
一.动物细胞融合技术
1.概念:使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
2.原理:细胞膜的流动性。
3.诱导方法:[化学]聚乙二醇(PEG)融合法
[物理]电融合法
[生物]灭活病毒诱导法等
4.结果:形成一个杂交细胞,该细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。
与植物原生质体融合的基本原理相同
形成了一个单核细胞
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1. “灭活病毒”中灭活的具体含义是什么?
用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力,但并不破坏它们的抗原结构
1.病毒在生物技术中的应用(1)灭活的病毒能作为诱导剂,不灭活的病毒不能作为诱导剂。(2)病毒在不同过程或操作中的“身份不同”。在免疫调节中病毒属于抗原,在基因工程中可作为载体,在细胞工程中可作为诱导剂。
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2. 灭活病毒诱导细胞融合的原理是什么?
病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用,使细胞互相凝聚,细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合
一.动物细胞融合技术
1.意义:突破了有性杂交的局限,使远缘杂交成为可能。
(1)细胞融合技术已经成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。
(2)利用动物细胞融合技术发展起来的杂交瘤技术,为制造单克隆抗体开辟了新途径。
2.应用
生物种类 细胞来源 成功年代
酵母菌-鸡 原生质体-血红细胞 1975年
人-胡萝卜 腹水癌细胞-原生质体 1976年
人-鼠 纤维肉瘤细胞-畸胎瘤细胞 1978年
动物细胞融合成功实例:
种间、属间、科间,甚至动物和植物之间的细胞融合都已获得成功
植物体细胞杂交 动物细胞融合
原理
细胞融合前的处理方法
诱导细胞融合的方法
细胞融合成功的标志
主要用途
意义
细胞膜具有一定的流动性、植物细胞的全能性
细胞膜具有一定的流动性
用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁
用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞
电融合法、离心法;聚乙二醇(PEG)融合法、高Ca2+-高pH融合法
PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法
再生出细胞壁
细胞核的融合
获得完整的杂种植株
主要用于制造单克隆抗体
打破生殖隔离,实现远缘杂交育种,培育植物新品种
突破了有性杂交的局限,使远缘杂交成为可能
动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较
1.右图为细胞融合的示意图,下列叙述正确的是( )
A.若a细胞和b细胞是植物细胞,需先去分化再诱导融合
B.a细胞和b细胞之间的融合需要促融处理后才能实现
C.c细胞的形成与a、b细胞细胞膜的流动性无关
D.c细胞将同时表达a细胞和b细胞中的所有基因
解析:选B。a、b细胞如果为植物细胞,则需要去细胞壁,但不需要去分化,A项错误;两细胞融合需要用物理或化学等方法促融,其融合过程体现了细胞膜具有一定的流动性,B项正确,C项错误;融合后的杂交细胞中的基因仍是选择性表达的,不会表达全部的基因,D项错误。
随堂检测
B
二.单克隆抗体及其应用
1.传统抗体的获得及特点
缺点:
产量低、纯度低、特异性差
抗原
反复注射动物
从动物的血清中分离抗体
由血清中提取的抗体是由不同浆细胞产生的多种抗体的混合物,可达百万种以上,
1.抗体是由何种细胞产生的?
B淋巴细胞——浆细胞
2.一个B淋巴细胞能产生多种抗体吗?
每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。
思 考
每一个B淋巴细胞只分泌一种化学性质单一,特异性强的抗体。
如果利用单个B淋巴细胞进行无性繁殖(克隆),形成细胞群,这样的细胞群就有可能产生出化学性质单一、特异性强的抗体——单克隆抗体。
问题:怎样获得化学性质单一、特异性强的抗体呢?
特异性抗体
无限增殖
无限增殖
特异性抗体
解决方案?
1975年,英国科学家米尔斯坦和德国科学家科勒大胆设想,设计了一个极富创造性的试验方案:
米尔斯坦
【英国】
科勒
【德国】
通过实验,他们得到了单克隆抗体。由于发明了单克隆抗体的制备技术,米尔斯坦和科勒于1984年获得了诺贝尔生理学或医学奖。
一个B淋巴细胞(产生单一的抗A的