内容正文:
§3-1 DNA是主要的遗传物质(第二课时)
基因的本质
质疑
Question
当时科学界深信蛋白质是遗传物质。
4.噬菌体侵染细菌的实验
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4.噬菌体侵染细菌的实验
赫尔希(右,A.D.Hershey,1908-1997)和蔡斯(左,M.C.Chase,1927-2003)
1952年
时 间
美国遗传学家赫尔希和他的助手蔡斯
科学家
放射性同位素标记技术
实验技术
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定义:是一种专门寄生在大肠杆菌体内的病毒。
结构:头部和尾部
成分:头部和尾部的外壳由蛋白质构成,头部含有DNA。
T2噬菌体的模式图
实验材料——T2噬菌体
头部
尾部
DNA
蛋白质
噬菌体侵染细菌的电镜照片
4.噬菌体侵染细菌的实验
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4.噬菌体侵染细菌的实验
思考7、噬菌体是如何侵染大肠杆菌的?
假设1:噬菌体的蛋白质外壳进入细菌,DNA未进入
假设2:噬菌体的DNA进入细菌,蛋白质外壳未进入
假设3:噬菌体的DNA和蛋白质外壳都进入了细菌
DNA
蛋白质
大肠杆菌
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4.噬菌体侵染细菌的实验
思考8、如何知道噬菌体的DNA和蛋白质外壳有没有进入细菌?
放射性同位素示踪法
DNA
蛋白质
大肠杆菌
思考9、标记那种元素?
DNA:C、H、O、N、P
蛋白质:C、H、O、N、S
32P
35S
用32P标记DNA,用35S标记蛋白质
思考10、能不能用3H、14C标记噬菌体?
不能,因为DNA和蛋白质中都含有C和H,无法确认被标记的是哪一种物质
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4.噬菌体侵染细菌的实验
DNA
蛋白质
大肠杆菌
思考11、能不能同时用32P和35S标记噬菌体?
不能,若同时用32P和35S标记噬菌体,则上清液和沉淀中均会有放射性,无法判断是哪种元素
思考12、如何标记噬菌体?
①先标记细菌:在含有放射性同位素32P/35S的培养基中培养细菌(大肠杆菌)。
②再标记噬菌体:用上述细菌(大肠杆菌)培养噬菌体,制备含32P/35S的噬菌体。
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蛋白质被35S标记的噬菌体
DNA被32P标记的噬菌体
在含35S的培养基中培养大肠杆菌
在含32P的培养基中培养大肠杆菌
未标记的T2噬菌体
标记T2噬菌体
感染
感染
得到
得到
4.噬菌体侵染细菌的实验
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4.噬菌体侵染细菌的实验
DNA
蛋白质
大肠杆菌
思考13、为什么不能直接用32P和35S的普通培养基来培养T2噬菌体?
因为T2噬菌体(病毒)营寄生生活,只有在细菌(大肠杆菌)内才能进行增殖,所以应该先培养细菌(大肠杆菌),再用细菌(大肠杆菌)培养噬菌体
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4.噬菌体侵染细菌的实验
噬菌体侵染细菌的实验
①标记大肠杆菌
②标记噬菌体
③标记的噬菌体侵染未标记的大肠杆菌
④保温一段时间
⑤搅拌
⑥离心
⑦检测上清液和沉淀物的放射性程度
目的:使噬菌体完成侵染过程
目的:使吸附在细菌上的噬菌体与细菌分离
目的:让上清液中析出较轻的噬菌体颗粒,而沉淀物中留下被感染的大肠杆菌
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4.噬菌体侵染细菌的实验
第一组实验:用35S标记的噬菌体(跟踪噬菌体的_____)侵染普通的大肠杆菌,保温一段时间,搅拌,离心,检测沉淀物(大肠杆菌)和上清液(病毒颗粒)的放射性。
第二组实验:用32P标记的噬菌体(跟踪噬菌体的_________)侵染普通的大肠杆菌,保温一段时间,搅拌,离心,检测沉淀物(大肠杆菌)和上清液(病毒颗粒)的放射性。
DNA
蛋白质
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4.噬菌体侵染细菌的实验
预期结果 第一组实验(35S标记跟踪蛋白质) 第二组实验(32P标记跟踪DNA)
假设1:注入的是蛋白质,DNA未进入 上清液: 上清液:
沉淀物: 沉淀物:
假设2: 注入的是DNA,蛋白质未进入 上清液: 上清液:
沉淀物: 沉淀物:
假设3:DNA和蛋白质都进入 上清液: 上清液:
沉淀物: 沉淀物:
放射性很高
无放射性
放射性很高
无放射性
放射性很高
无放射性
放射性很高
无放射性
放射性很高
无放射性
放射性很高
无放射性
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T2噬菌体侵染大肠杆菌
4.噬菌体侵染细菌的实验
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35S标记的噬菌体
32P标记的噬菌体
离心后
离心后
上清液的
放射性很高
沉淀物的
放射性很低
细菌裂解
细菌裂解
沉淀物的
放射性很高
上清液的
放射性很低
在新形成的噬菌体中没有检测到35S
在新形成的部分噬菌体中检测到32P
用标记的噬菌体侵染未标记的细菌
在搅拌器中搅拌、离心,检测上清液和沉淀物中的放射性物质
35S标记的噬菌体与细菌混合
32P标记的噬菌体与细菌混合
噬菌体分别被35S或32P标记
搅拌后离心
搅拌后离心
思考14:说明了什么?
思考15:说明了什么?
4.噬菌体侵染细菌的实验
标记蛋白质
标记DNA
放射性标记的噬菌体蛋白质外壳没有进入大肠杆菌
放射性标记的噬菌体DNA进入了大肠杆菌
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