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热点6基因工程中PCR的原理及应用
热点提升练
一、选择题
1.(2022·全国高三专题练习)Kisspeptin(Kp)是脊椎动物的一种肽
类激素,对下丘脑分泌促性腺激素释放激素(GRH)的神经元有活化作
用。研究者为探究Kp、GnRI以及GnR阳受体的相关基因在下丘脑和垂
体中的表达情况,提取下丘脑和垂体中的RNA,采用RT-PCR扩增DNA
(T是反转录)进行检测。下列有关叙述不正确的是(D)
A.RT-PCR过程需要的酶有逆转录酶、TagDNA聚合酶
B.PCR扩增时可以相关基因的mRNA的核苷酸序列为依据设计引物
C.检测RT-PCR的产物可采用DNA分子杂交和荧光分子杂交技术
D.可检测到Kp受体、GRH、GnRH受体相关基因均在下丘脑中表达量
最高
解析:根据题意可知,Kp受体和GRH基因在下丘脑中表达量会比较高,
但GH受体基因应该是在垂体中表达较高,因为垂体分祕细胞才是
GnRH的靶细胞。
2.(2022·北京高三专题练习)研究人员用如图1中质粒和图2中含目
的基因的片段构建重组质粒(图中标注了相关限制酶切割位点),将重
组质粒导入大肠杆菌后进行筛选及PC℉鉴定。以下叙述不正确的是(
C)
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四环素抗性基因
BamH I
Bel I
质粒
BamH I
HindⅢ
启动子
氨苄青霉素
抗性基因
图1
BamH I引物甲
HimdⅢ
↓☑
口
BclI目的基因引物丙
引物乙
图2
A.构建重组质粒的过程应选用Bc1I和HindIII两种限制酶
B.使用DNA连接酶将酶切后的质粒和目的基因片段进行重组
C.能在添加四环素的培养基上生存的一定是含有重组质粒的大肠
杆菌
D.利用PCR鉴定含目的基因的大肠杆菌时应选用引物甲和引物丙
解析:能在添加四环素的培养基上生存的也可能是只含有质粒的大肠
杆菌。
3.利用PCR既可以快速扩增特定基因,也可以检测基因的表达。下列
有关PCR的叙述,错误的是(D)
A.PCR用的DNA聚合酶是一种耐高温酶
B.变性过程中,双链DNA的解开不需要解旋酶
C.复性过程中,引物与模板链的结合遵循碱基互补配对原则
D.延伸过程中,需要4种核糖核苷酸
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解析:延伸过程中,需要的是4种脱氧核糖核苷酸。
4.控制哺乳动物的性别对于畜牧业生产具有十分重要的意义。SRY基
因是Y染色体上决定雄性性别的基因,SRY-PCR胚胎性别鉴定技术是
现阶段进行胚胎性别鉴定最准确和最有效的方法。下列说法错误的是
(D)
A.可利用Y精子DNA含量比X精子低的差异筛选两种精子,从而对胚
胎性别进行控制
B.从Y染色体DNA分子上获取SRY基因,可用SRY基因的核苷酸序列
设计引物
C.SRY-PCR胚胎性别鉴定技术中,要用到SRY基因特异性探针进行
检测
D.利用PCR经过3次循环,理论上获得的SRY基因占扩增产物一半
解析:因为经过3次循环之后才能出现目的基因的片段,故利用PCR经
过3次循环,理论上获得的SRY基因占扩增产物的1/4。
5.从自然界中的生物体内分离得到的天然酶,在工业生产环境中催化
效率往往较低。科研人员对酶的改造包括理性设计方法和非理性设计
方法。理性设计方法是通过定点诱变改变蛋白质中的个别氨基酸,以
产生更加理想的酶:非理性设计方法主要通过易错PCR技术实现,该
技术是利用低保真的TaqDNA聚合酶和改变PCR的反应条件,降低DNA
复制的保真度,从而使扩增产物出现较多突变点的一种体外诱导DNA
序列变异的方法。下列相关叙述错误的是(D)
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A.通过理性设计以产生更加理想的酶的技术称为蛋白质工程
B.低保真的TagDNA聚合酶会增加新DNA链合成过程中碱基的错配率
C.利用易错PCR技术扩增产物时在PCR反应缓冲液中一般会添加Mg2
+
D.易错PCR技术的扩增过程中50℃处理的目的是使DNA分子彻底
变性
解析:通过理性设计,能够产生并得到更加理想的酶的技术称为蛋白
质工程;低保真的TagDNA聚合酶会增加新DNA链合成过程中碱基的错
配率,会产生较多的突变点:Mg2+可以激活DNA聚合酶,故利用易错PCR
技术扩增产物时在PCR反应缓冲液中一般会添加Mg2+;易错PCR技术
的扩增过程中50℃处理的目的是使引物与模板结合。
6.滁菊为菊科多年生草本植物,长期营养繁