3.2基因工程的基本操作程序(聚合酶链式反应）课件-2022-2023学年高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

第3章 基因工程 第2节基因工程的基木操作程序 PCR PCR扩增仪 PCR概念 PCR技术：PCR是聚合酶链式反应的缩写，是一项根据 DNA半保留复制 的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组伤 反应条件对 目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术； 全称 聚合酶链式反应 原理 DNA半保留复制 操作环境 体外(PCR扩增仪/PCR仪) 目的 对目的基因的核苷酸序列进行大量复制 优点： 特异性地快速扩增目的基因 PCR条件 DNA复制所需的基本条件： 参与的组分 在DNA复制中的作用 解旋酶 (体外用高温代替) 打开DNA双链 DNA母链 提供DNA复制的模板 4种脱氧核苷酸 合成DNA子链的原料 DNA聚合酶 (体外用耐高温的DNA聚合酶) 催化合成DNA子链 引物(2种) 使DNA聚合酶能够从引物的3' 端开始连接脱氧核苷酸 引物是一小段能与DNA母递的一段碱基序列 互补配的 短单链核酸 5 引物 3?子嵌延伸 DNA母链 5 31 3 5 DNA母链 子嵌延伸 引物 PCR条件 u DNA模板 四种脱氧核苷酸 引物(2种) 稳定的缓冲溶液 (一般添加Mg2+) 耐高温的DNA聚合酶 (TaqDNA聚合酶) 激活真核细胞和细菌 的DNA聚合酶 PCR演示 国+往 隔环 损火 延甲 Annealing CYCLE 1 Denaturation Extension 95C 55-659C 729C IHHIIHIHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHHIHHIHII 0106 11012110350 白动信恢的包口国图 PCR过程 5 3 5 3 A变性 B复性 C延伸 5 3 当温度上升到72℃左右时， 当温度上升到90℃以上时， 当温度下降到50℃左右时， 溶液中的4种脱氧核苷酸在 双链DNA解聚为单链 两种杛引物通过碱基互补配 耐高温的DNA聚合酶的作用 对与两条单链DNA结合 下，根据碱基互补配对原则 合成新的DNA链 PCR过程 思考：PCR技术获取目的基因时至少要经过几次循环才能从DNA 分子中分离出目的基因？ 第三次循环 3 PCR过程 思考：2.PCR技术最终哪陪部分被大量复制了？ 引物对之间的部分 5 3 3 5 3 3 思考：3.PCR物设计应遵循哪些原则？ 引物自身及引物之间不应存在互补序列等 思考：4.一个DNA,一对物(A与B),通过PCR扩增n次： ①子代DNA分子中等长链DNA分子数为： 2n-2T ②复制过程中共需引物 2n+1-2个 PCR技术与细胞内DNA复制的比较 ——_④引物：都需要引物，使DNA聚合酶从引物开始进行互补链的合成 【检测】“X基因是DNA分子上一个有遗传效应的片段，若要用PCR技 术特异性地拷贝“X基因”，需在PCR反应中加入两种引物（注：引物的作 用是与模板链形成双链后在DNA聚合酶的作用下就可以继续链的诞伸)， 两种引物及其与模板链的结合位置如下图甲所示。经4轮循环后产物中有 五种不同的DNA分子，如下图乙所示，其钟第⑤种DNA分子有() A 引物1 引物2 3 5 3 5 5 3 3 3 ① ② 5 3 3 3 51 ⑤ X基因 5 3 3 ③ ④ 甲 乙 A.8个 B.6个 C.4个 D.2个