热点微专题07 PCR技术拓展和应用-【热点微专题】备战2023年高考生物微专题解读与训练

PCR技术拓展和应用 【核心知识回顾】 1、利用PCR获取和扩增目的基因 ①原理　　　　　　　　。 ②基本条件：a、场所：在一定的　 　溶液中进行，其中一般要添加 ；b、模板：DNA母链；c、原料：4种　　　　　 ；d、酶：　　 　的DNA聚合酶；e、引物： 种，使DNA聚合酶能够从引物的　　端开始连接脱氧核苷酸。 ③扩增过程 过程 说明 图解 变性 温度超过 ℃时，双链DNA解聚为单链 温度下降到50 ℃左右时， 种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合 延伸 温度上升到 ℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸在 的DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链 ④鉴定：常采用　　　　　　　 来鉴定PCR的产物。 【典型例题】 1、下列有关PCR技术中引物的叙述，正确的是( ) A、引物是一小段DNA分子或双链RNA分子 B、扩增一个DNA分子至少需要的引物数目等于新合成的DNA子链数目 C、两种引物之间能够发生碱基互补配对，两引物分别是子链延伸的起点，并可以反复利用 D、DNA聚合酶只能从引物的5＇端连接脱氧核苷酸 2、(2021年湖北高考真题)某实验利用PCR技术获取目的基因，实验结果显示除目的基因条带(引物与模板完全配对)外，还有2条非特异条带(引物和模板不完全配对)。为了减少反应非特异条带的产生，以下措施中有效的是( ) A、增加模板DNA的量 B、延长热变性的时间 C、延长延伸的时间 D、提高复性的温度 3、(2020·北京)为了对重金属污染的土壤进行生物修复，研究者将从杨树中克隆的重金属转运蛋白(HMA3)基因与外源高效启动子连接，导入杨树基因组中(如图)。为检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的HMA3基因，同时避免内源HMA3基因的干扰，在进行PCR扩增时，应选择的引物组合是(　　) A、①＋③ B、①＋② C、③＋② D、③＋④ 4．利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似(如下图所示)。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。下列叙述错误的是(　　) A、用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列 B、设计引物时需要避免引物之间形成碱基互补配对而造成引物自连 C、复性温度过高可能导致PCR反应得不到任何扩增产物 D、第四轮循环产物中同时含有引物A和引物B的DNA片段所占的比例为15/16 5、(2021·石家庄模拟)锦鲤疱疹病毒是一种双链DNA病毒。如图为TaqMan荧光探针技术的原理示意图，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时该探针被Taq酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增1个DNA分子，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。下列有关叙述不正确的是(　　) A、在基因工程中，目前获取目的基因的常用方法有从基因文库中获取、PCR技术扩增等 B、引物的化学本质是DNA单链 C、引物中的GC含量比探针中的略高，这有利于保证退火时引物先与模板DNA结合 D、若最初反应体系中只有一个病毒DNA分子，经n次循环后，需要消耗TaqMan荧光探针2n－1个 6、荧光PCR法根据化学发光原理可以分为染料法和探针法。染料法中特殊染料本身不发光，但是当PCR扩增的时候，染料能够与DNA双链结合从而发光，如图1所示。探针法中除了引物外另外设置了一个探针，在探针的两端分别带上发光基团和淬灭基团，此时发光基团并不发光，但是当DNA通过引物合成的时候，探针被酶切降解释放出发光基团和淬灭基团，两种基团分开后产生荧光，如图2所示。下列说法错误的是(　　) A、两种方法均可用于目标DNA的定量分析 B、与染料法相比，探针法的特异性更强 C、通过适当延长引物长度和降低复性温度可提高荧光PCR的特异性 D、用荧光PCR法检测人体是否感染新冠病毒前需要先进行逆转录 7、用PCR技术特异性地拷贝“X基因”，两种引物及其与模板链的结合位置如图所示。经4轮循环后产物中有五种不同的DNA分子，下列叙述错误的是(　　) A、第一轮复制得到2个DNA分子，即①②各一个 B、第二轮复制得到4个DNA分子，即①②③④各一个 C、第三轮复制得到8个DNA分子，其中有2个是等长的，也就是有2个X基因 D、第四轮复制得到16个DNA分子，其中有4个X基因 8、用PCR技术将DNA分子中的A1片段进行扩增，设计了引物Ⅰ、Ⅱ，其连接部位如图所示，x为某限制酶识别序列。扩增后得到的绝大部分DNA片段是图中的(　　) 9、(2022·山东·高考真题)某种