内容正文:
第1节 动物细胞工程
(第一课时-动物细胞培养)
第二章 细胞工程
希普:首例胚胎移植成功
哈里森:首创动物组织体外培养法
张明觉:发现哺乳动物精子获能现象
格登、童第周:体细胞核移植成功
试管家兔诞生
米尔斯坦和科勒:创立单克隆抗体技术
胚胎分割移植成功
埃文斯:成功分离和培养小鼠的胚胎干细胞
克隆羊多莉诞生
山中伸弥:获得诱导多能干细胞
单细胞基因组测序进行遗传病筛查的试管婴儿诞生
我国科学家首次培育了体细胞克隆猴
1890年
1907年
1951年
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本节聚焦
1.动物细胞培养需要哪些基本条件?
2.动物细胞培养的基本操作过程是什么?
3.怎样客观分析干细胞在临床上的应用所产生的效益与风险?
【从社会中来】P43
在治疗大面积烧伤时,通常采用的方法是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对这样的病人来说,自体健康皮肤非常有限,使用他人皮肤来源又不足,而且会产生免疫排斥反应。
讨论:异体移植面临的问题: 。
供体器官短缺、免疫排斥等
获得大量的自体健康皮肤的方法: 。
取少量正常、健康的皮肤在体外进行培养、扩增;
皮肤干细胞培养(研究中)
通过细胞培养构建的人造皮肤
新课引入
通过细胞培养构建的人造皮肤
在治疗大面积烧伤时,通常采用的方法是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对这样的病人来说,自体健康皮肤非常有限,使用他人皮肤来源又不足,而且会产生免疫排斥反应。那么,
怎样才能获得大量的自体健康皮肤?能不能用自体皮肤的单个细胞培养出可供移植的皮肤?
【提示】可以从病人身上取少量正常、健康的皮肤在体外进行培养、扩增。目前,科学家还在研究对皮肤干细胞进行培养,以获得适合临床上使用的人造皮肤。
新课引入
动物细胞融合
动物细胞培养
动物体细胞核移植
动物细胞工程
基础
新课引入
一、动物细胞培养
1.概念:从动物机体中取出相关组织,将它们分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖的技术。
2.原理:细胞增殖
3.培养终点:细胞
动物细胞培养
所需的基本条件
一般来说,动物细胞培养(模拟体内细胞正常生长增殖的环境)需要满足以下条件:
营养条件
其他条件
无菌、无毒的环境
适宜的温度、pH和渗透压
适宜的气体环境
糖类、氨基酸、无机盐、维生素……
二、动物细胞培养的条件
将细胞所需的营养物质按照种类和所需量严格配制而成的培养基,称为合成培养基
使用合成培养基时,(因为对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚)通常需要加入血清等天然成分
培养动物细胞一般使用液体培养基,也叫培养液
二、动物细胞培养的条件
营养
为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清?
1、血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等,
2、氨基酸有多种,是细胞合成蛋白质的基本成分,其中有些氨基酸动物细胞本身不能合成(称为必需氨基酸),必须由培养液提供。
3、血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子;血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质,这是细胞生长和增殖所必需的,能促进细胞的生长、增殖和贴附。
4、因此,细胞培养时,要保证细胞能够顺利生长和增殖,一般需添加10%~20%的血清。
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二、动物细胞培养的条件
II.无菌、无毒的环境
无菌:
①对培养液和所有培养用具进行灭菌处理
②在无菌环境下进行操作
定期更换培养液,(清除代谢物,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害)
无毒:
二、动物细胞培养的条件
III.温度、pH和渗透压
哺乳动物多以(36.5±0.5)℃
温度:
pH:
多数细胞生存的适宜pH在7.2~7.4
渗透压:
需要考虑的一个重要环境参数
培养瓶
二、动物细胞培养的条件
IV.气体环境
O2:
细胞代谢所必需的
CO2:
维持培养液的pH
(95%空气和5% CO2 )
微生物培养中的作用不同(为自养型微生物提供碳源)
CO2培养箱中培养
动物
组织块
分散成
单个细胞
机械法
胰蛋白酶
胶原蛋白酶处理
思考1.常用胰蛋白酶分散细胞,这说明细胞间的物质主要是什么成分?用胃蛋白酶行吗?
说明细胞间的物质主要是蛋白质。
胃蛋白酶作用的适宜pH约为2,当pH大于6时,胃蛋白酶就失去活性,多数动物细胞培养的适宜pH为7.2~7.4,胃蛋白酶在此环境中没有活性,所以用胃蛋白酶不行。
三、动物细胞培养的过程
动物
组织块
分散成
单个细胞
机械法
胰蛋白酶
胶原蛋白酶处理
思考2.用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理组织块,使组织分散成单个细胞的目的是什么?