专题12 目的基因的检测和鉴定-备战2023年高考生物重难点专题精讲课件

要检测目的基因是导入了受体细胞中，那么要提取受体细胞中的DNA还是RNA？ 要检测目的基因是否在受体细胞中转录，那么要提取受体细胞中的DNA还是RNA？ 如果母目的基因在受体细胞中表达，但是受体细胞没有抗虫特性，原因可能是什么？ 课本83页，如何防止棉铃虫对Bt抗虫蛋白出现抗性？ 课本83页，拓展应用-1？ 目的基因的检测和鉴定 1.DNA水平的检测 法1：通过DNA杂交检测： 法2：通过PCR+电泳检测： GDNF是一种神经营养因子,对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含GDNF基因的表达载体(如图1所示),并导入到大鼠神经干细胞中,用于干细胞基因治疗的研究。请回答: (1)在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中,使用胰蛋白酶的目的是：　　　　　　 (2)构建含GDNF基因的表达载体时,需选择图1中的　　　限制酶进行酶切。  (3)经酶切后的载体和GDNF基因进行连接,连接产物经筛选得到的载体主要有3种:单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接(如图1所示)。为鉴定这3种连接方式,选择HpaⅠ酶和BamHⅠ酶对筛选得到的载体进行双酶切,并对酶切后的DNA片段进行电泳分析,结果如图2所示。图中第　　　　泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。  (4)将正向连接的表达载体导入神经干细胞后,为了检测GDNF基因是否成功表达,可用相应的　　　　与提取的蛋白质杂交。当培养的神经干细胞达到一定密度时,需进行　　　　培养以得到更多数量的细胞,用于神经干细胞移植治疗实验。  答案　(1)使细胞分散开　(2)XhoⅠ　(3)②　(4)抗体　传代 2.mRNA水平 核酸杂交 3.蛋白质水平 抗原和抗体杂交 4.个体水平 a.双抗生素标记法： b.蓝白斑筛选法： c.荧光蛋白示踪： e.自交或测交： a.双抗生素抗性基因标记筛选 黄皮，67页，11T 针对训练-1 针对训练-1 答案 二者均不含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均不生长 含有质粒载体 含有插入了目的基因的重组质粒（或答含有重组质粒） 二者均含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均能生长 四环素 答案　(1)平　(2)胸腺嘧啶(T)　DNA连接　(3)B　A类菌落含有P0　C类菌落未转入质粒　(4)乙丙　目的基因反向连接 B基因存在于水稻基因组中，其仅在体细胞（2n）和精子中正常表达，但在卵细胞中不转录。为研究B基因表达对卵细胞的影响，设计了如下实验。 针对训练-3 （1）B基因在水稻卵细胞中不转录，推测其可能的原因是卵细胞中 （单选）。 A．含B基因的染色体缺失 B．DNA聚合酶失活 C．B基因发生基因突变 D．B基因的启动子无法启动转录 针对训练-3 （2）从水稻体细胞或 中提取总RNA，构建 文库，进而获得B基因编码蛋白的序列。将该序列与Luc基因（表达的荧光素酶能催化荧光素产生荧光）连接成融合基因（表达的蛋白质能保留两种蛋白质各自的功能），然后构建重组表达载体。 （3）在过程①、②转化筛选时，过程 中T-DNA整合到受体细胞染色体DNA上，过程 在培养基中应加入卡那霉素。 针对训练-3 （4）获得转基因植株过程中，筛选方式正确的是 （多选）。 A．将随机断裂的B基因片段制备成探针进行DNA分子杂交 B．以Luc基因为模板设计探针进行DNA分子杂交 C．以B基因编码蛋白的序列为模板设计探针与从卵细胞提取的mRNA杂交 D．检测加入荧光素的卵细胞中是否发出荧光 针对训练-3 （5）从转基因植株未成熟种子中分离出胚，观察到细胞内仅含一个染色体组，判定该胚是由未受精的卵细胞发育形成的，而一般情况下水稻卵细胞在未受精时不进行发育，由此表明 。 针对训练-3 答案 （1）D （2）精子 cDNA （3）② ① （4）BCD （5）B基因表达能使卵细胞不经受精直接发育成胚 b.蓝白斑筛选 蓝色菌落：受体细胞转入了质粒载体； 白色菌落：受体细胞转入了重组DNA ； 针对训练 选三课本，98页，第一题。 c.荧光蛋白示踪 检测目的基因的表达水平：目的基因的启动子+GFP基因； 检测目的基因分布位置：目的基因的启动子+目的基因+GFP基因； 利用基因编辑技术将病毒外壳蛋白基因导入猪细胞中，然后通过核移植技术培育基因编辑猪，可用于生产基因工程疫苗。下图为基因编辑猪培育流程，请回答下列问题： （1）对1号猪使用_________处理，使其超数排卵，收集并选取处在__________时期的卵母细胞用于核移植。 （2）采集2号猪的组织块，用__________