1.2.2 微生物的培养和计数（含视频）-【互动新课堂】2022-2023学年高二生物同步优质课件（人教版2019选择性必修3）

Selection, culture and counting of microorganisms 第2节 微生物的培养技术及应用 微生物的选择培养和计数 2 关于纯培养 采用平板划线法和稀释涂布平板法能将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。 自然界中微生物数量繁多，种类庞杂 目的微生物往往不是混合菌群中的优势种 来自大自然的启示 来自大自然的启示 ——自然界中目的基因的筛选 Taq酶 美国黄石热泉 必须能耐受93℃左右的高温 水生耐热细菌中分离得到Taq 腾冲热泉 嗜酸嗜热菌——硫化叶菌 扎布耶茶卡盐湖 嗜盐菌——方形甚至三角形的单细胞结构 来自大自然的启示 来自大自然的启示 ——自然界中目的基因的筛选 依据 根据它对生存环境的要求，到相应环境中去寻找 微生物的选择培养 实验室中目的微生物的筛选 01 人为提供有利于目的菌株生长的条件 （温度、PH、营养等） 02 抑制或防止其它微生物的生长 选择培养基 选择培养基的概念 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。 选择培养基 选择培养基的创建方法 加入青霉素的培养基 在培养基中加入某种化学物质 改变培养基中的营养成分 改变微生物的培养条件 分离得到酵母菌、霉菌等 加入高浓度食盐的培养基 分离得到金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物 高温环境下培养 耐高温微生物 无氧条件下培养 厌氧型微生物 8 材料分析 1 尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。 3 2 ？ 尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。 能分解尿素的细菌能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以作为细菌生长的氮源。 能否配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？ CO(NH2)2+H2O 脲酶 CO2+2NH3 选择培养基配方设计 选择培养基 碳源 氮源 葡萄糖、尿素 尿素 此培养基为选择培养基 只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存。 10 材料分析 1 尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。 3 2 ？ 尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。 能分解尿素的细菌能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以作为细菌生长的氮源。 怎么证明你设计的选择培养基具有选择性呢？ CO(NH2)2+H2O 脲酶 CO2+2NH3 选择培养基配方设计 选择培养基 设置基础培养基/完全培养基做对照 牛肉膏蛋白胨培养基 选择培养基 若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数菌多于该选择培养基 则该选择培养基具有选择性 若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数菌几乎等于该选择培养基 则该选择培养基不具有选择性 选择培养基 统计菌体数目 1 2 显微镜直接计数法 稀释涂布平板计数法 方法一缺点 不能区分死菌与活菌 稀释涂布平板法（统计菌落数） 原理 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过计数平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌 关键 恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键 梯度稀释 铲取土样(去表层)，将样品装入纸袋中 步骤一 步骤二 步骤三 将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液 取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释 涂布平板 步骤三 从试管中取0.1mL菌液，滴加到培养基表面 步骤四 用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀 微量移液器 微量移液器 (micropipet) 是进行生化实验或分子生物学实验的必备工具。 注意事项二 过程中所有操作都应在酒精灯火焰旁进行 注意事项一 将涂布器从酒精中取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后再放在火焰上灼烧；不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃酒精。 稀释涂布平板法 理性分析 2. 计算公式？（个/ml） 3.计算结果与实际值的误差？. 4. 如何对目的菌进行验证验证？ 1.为何要选择多个稀释度分别涂布？ 稀释涂布平板法 平板选择 平板菌落数 细菌 放线菌 霉菌（真菌） 30-300 30-300 10-100 稀释度的选择范围 104、105、106 103、104、105 102、103、104 稀释涂布平板法 a b 甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230 乙同学在该浓度