3.1DNA的粗提取和鉴定课件2022-2023学年高二下学期生物人教版选择性必修3

DNA的粗提取与鉴定 1 一、基础知识 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质上的差异，提取DNA，去除其他成分。 2、细胞中除了DNA，还有哪些生物大分子？ 1、DNA分子存在于细胞中的哪些结构呢？ 真核细胞：细胞核（染色体）、线粒体、叶绿体 原核细胞：拟核、质粒 3、如何去除其他成分，提取DNA？ RNA、蛋白质、脂质、糖类等 2 （1）DNA不溶于酒精溶液 DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 二、实验原理 （2）DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 1、DNA粗提取原理 DNA能溶于2mol/L的NaCI溶液中 ——初步分离DNA与蛋白质 ——溶解DNA 使用预冷酒精，效果会更好 3 2、DNA的鉴定原理 DNA + 二苯胺试剂 沸水浴 蓝色 现配现用 二、实验原理 使用时： 注意安全 4 三、材料用具 不同生物的组织中DNA含量不同。在选取材料时，你认为应该遵循什么原则？ 1、实验材料的选取 DNA含量高、材料易得、便于提取 你认为如下提供的材料中哪些不适合提取DNA？为什么？ 供选材料： 新鲜洋葱、 香蕉、 菠菜、 菜花、 苹果、 猕猴桃、 沃柑、 猪肝、 鱼卵、 鸡血、 哺乳动物的成熟红细胞； ❌ 5 四、实验步骤：提取DNA 步骤一：获取DNA 研磨液： 10mL（2mol/L）NaCI溶液、1滴洗洁精 研磨 想一想，这些成分分别有什么作用？ 2mol/L NaCl溶液：促进DNA的溶解 洗洁精：破坏细胞膜 6 步骤二： 四、实验步骤：提取DNA 过滤 一、实验收集的是滤液还是沉淀呢？ 滤液 7 向滤液中加入等体积的（95%）预冷酒精溶液，静置2-3min，用玻璃棒沿着同一方向缓慢搅拌，卷起白色丝状物。 步骤三：析出DNA 四、实验步骤：提取DNA 防止DNA断裂。 实验中出现的丝状物的主要成分是 DNA ，实际上每一根“丝”都是由许多 DNA 分子聚集在一起形成的。 8 材料的获取与研磨 析出DNA 收集滤液 四、实验步骤：提取DNA 9 你提取出白色丝状物或沉淀物了吗？ 1号试管 2号试管 丝状物(DNA) 用玻璃棒搅拌 无 丝状物溶解 加入二苯胺试剂 2mL 2mL 沸水浴 5min 5min 观察现象 不变蓝 变蓝 四、实验步骤：DNA的鉴定 不加入 加入 加入2mol/L NaCl溶液 2mL 2mL 11 五、实验结论 用二苯胺试剂鉴定的结果如何？ 12 六、分析与讨论 1.如果鉴定结果不明显，可能有哪些原因造成的？ 2.粗提取的DNA中可能会含有哪些杂质？ ①材料中的核DNA没有充分释放出来，如研磨不充分或收集的滤液的量过少 ②加入酒精后摇动或搅拌过猛，DNA被破坏 ③实验材料的选取 核蛋白、多糖、RNA等杂质 13 3.为了实验效果更加明显，可以将收集的滤液置于4℃冰箱几分钟后再取上清液进行析出DNA，这样做的目的是什么？ 降低核酸酶活性，防止DNA被水解 4.如果实验材料是鸡血细胞，获取DNA滤液的方法一样吗？ 用蒸馏水获取DNA，因为血细胞在蒸馏水中大量吸水涨破 14 3.如果实验材料是鸡血细胞，获取DNA滤液的方法一样吗？ 用蒸馏水获取DNA，因为血细胞在蒸馏水中大量吸水涨破 4.你有什么方法可以让提取的DNA纯度更高？ ①反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质 ②滤液中加入嫩肉粉（木瓜蛋白酶） ③滤液经过60-70℃处理后过滤 15 刑侦破案 拓展：DNA提取的应用 基因组测序 插入人胰岛素基因的大肠杆菌 基因工程 亲子鉴定 16 以鸡血为实验材料的实验设计（参考方案）： $