3.2.1DNA片段的扩增及电泳鉴定课件-6-2022-2023学年高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

探究·实践：DNA片段的扩增及电泳鉴定 一、实验目的 1.了解PCR和琼脂糖凝胶电泳鉴定的基本原理。 2.尝试进行PCR的基本操作并用电泳鉴定PCR的产物。 DNA片段的扩增及电泳鉴定 实践探究 一、实验原理 1.DNA体外扩增的原理 PCR利用了DNA热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的 与 。 PCR仪实质上就是一台能够自动调控温度的仪器，一次PCR一般要经历30次循环。 PCR 的产物一般通过 来鉴定。 2.DNA片段电泳鉴定的原理 琼脂糖凝胶电泳 解聚 结合 DNA片段的扩增及电泳鉴定 实践探究 一、实验原理 1.DNA体外扩增的原理 PCR利用了DNA热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的 与 。 PCR仪实质上就是一台能够自动调控温度的仪器，一次PCR一般要经历30次循环。 PCR 的产物一般通过 来鉴定。 2.DNA片段电泳鉴定的原理 DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷 的电极移动，这个过程就是电泳。 琼脂糖凝胶电泳 相反 解聚 结合 在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。 凝胶电泳原理示意图 若电泳缓冲液使DNA带负电荷，加样孔侧应连电极的哪一极？负极 DNA片段的扩增及电泳鉴定 实践探究 一、实验原理 1.DNA体外扩增的原理 PCR利用了DNA热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的 与 。 PCR仪实质上就是一台能够自动调控温度的仪器，一次PCR一般要经历30次循环。 PCR 的产物一般通过 来鉴定。 2.DNA片段电泳鉴定的原理 DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷 的电极移动，这个过程就是电泳。 在凝胶中DNA分子的迁移速率与 等有关。 凝胶中的DNA分子通过 ，可以在波长为300nm的 下被检测出来。 琼脂糖凝胶电泳 相反 解聚 结合 凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象 紫外灯 加样孔→ PCR仪、微量离心管、微量移液器、一次性吸液枪头 电泳装置（包括电泳仪、电泳槽、电泳缓冲液、凝胶载样缓冲液等） 4种脱氧核苷酸的等量混合液、2种引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA 扩增缓冲液、无菌水、 琼脂糖和核酸染料等 二、材料用具 DNA片段的扩增及电泳鉴定 实践·探究 用于向微量离心管中转移PCR配方中的液体，每吸取一种试剂后，其上的枪头都必须更换 自动调控温度，实现DNA的扩增 微量移液器 一次性 吸液枪头 二、材料与用具 三、方法步骤 用微量移液器按照PCR反应体系配方或PCR试剂盒的说明书，在微量离心管中依次加入各组分。 移液 DNA片段的扩增及电泳鉴定 实践探究 PCR技术 PCR反应体系的配方 10倍浓缩的扩增缓冲液 5ul 20mmol/l 的4种脱氧核苷酸的等量混合液 1ul 20umol/l 的引物I 2.5ul 20umol/l 的引物II 2.5ul H2O 28-33ul 1-5U/ul 的Taq DNA聚合酶 1-2U 模板DNA 5-10ul 总体积 50ul 注：模板DNA的用量为1pg-1ug DNA片段的扩增及电泳鉴定 实践探究 实际上是进行PCR反应的场所 PCR技术 三、方法步骤 用微量移液器按照PCR反应体系配方或PCR试剂盒的说明书，在微量离心管中依次加入各组分。 待所有组分都加入后，盖严离心管的盖子。将微量离心管放入离心机里，离心约10s，使 。 移液 离心 DNA片段的扩增及电泳鉴定 实践探究 PCR技术 反应液集中在离心管的底部 三、方法步骤 用微量移液器按照PCR反应体系配方或PCR试剂盒的说明书，在微量离心管中依次加入各组分。 待所有组分都加入后，盖严离心管的盖子。将微量离心管放入离心机里，离心约10s，使 。 参照下表的参数，设置好PCR仪的循环程序。将装有反应液的微量离心管放入PCR仪中进行反应。 循环程序 变性 复性 延伸 预变性 940C，5min 30 次 940C, 30s 550C, 30s 720C，1min 最后一次 940C，1min 550C, 30