1.2 微生物的培养技术及应用（第2课时）（上课用课件）-2022-2023学年高二生物同步精品课堂（人教版2019选择性必修3）

1.2 微生物的培养技术及应用（第2课时） 教学目标 1.概述培养基的营养构成和种类 2.概述无菌技术的原理和方法，掌握无菌操作 3.通过配制培养酵母菌的马铃薯蔗糖培养基，初步掌握配制培养基的基本技能 4.概述分离和纯化微生物的平板划线法和稀释涂布平板法 5.概述测定微生物数量的稀释涂布平板法和显微镜计数法 (1)概念：由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。 (2)方法步骤 配制培养基 灭菌 倒平板 接种和分离 培养 微生物群 分散或稀释 单个细胞 单个菌落 繁殖 3.微生物的纯培养 一 微生物的基本培育技术 不同菌落的形状、大小、颜色等不同。菌落是鉴定菌种的重要依据。 （1）配制培养基 配制培养基：称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖、15-20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml。 表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成 组分 含量 提供的主要营养 牛肉膏 5g 碳源、磷酸盐和维生素等 蛋白胨 10g 氮源和维生素等 NaCl 5g 无机盐 H2O 定容至1000ml 水 4.酵母菌的纯培养 一 微生物的基本培育技术 称取去皮的马铃薯200g 切成小块 加水1000mL，加热煮沸至马铃薯软烂 用纱布过滤 滤液中加入20g葡萄糖，15~20g琼脂 用蒸馏水定容至1000mL 得到滤液 （1）配制培养基 4.酵母菌的纯培养 一 微生物的基本培育技术 （2）灭菌 将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa 、温度为121℃的条件下，灭菌15-30min。 将5-8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160-170℃ 灭菌2h。 4.酵母菌的纯培养 一 微生物的基本培育技术 将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞 包上牛皮纸，并用皮筋勒紧 压力100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15 ~ 30min 取5 ~ 8套培养皿 培养皿叠成一束 用几层牛皮纸包紧 放入干热灭菌箱内，160 ~ 170℃灭菌2h （1）配制培养基 4.酵母菌的纯培养 一 微生物的基本培育技术 (2)方法步骤 配制培养基 灭菌 倒平板 倒平板：待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。倒平板的具体操作步骤如下： ①拔出锥形瓶的棉塞。 ②将瓶口迅速通过火焰。 ③用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10～20 mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖。 ④等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置。 仔细看图：在倒平板的过程中，为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 （3）倒平板 4.酵母菌的纯培养 一 微生物的基本培育技术 配制培养基 灭菌 倒平板 (2)方法步骤 待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰旁附近倒平板。倒平板的具体操作步骤如下。 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 不要完全打开，以免杂菌污染培养基 既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染，又可以使培养基中的水分较快地蒸发。 琼脂是一种多糖，在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，倒平板时高于50℃会烫手，低于50℃时，若不及时操作，琼脂会凝固。 4.酵母菌的纯培养 一 微生物的基本培育技术 （3）倒平板 接种：指在无菌条件下将微生物或含菌材料转移到合适其生长繁殖的培养基中的过程。 接种工具： 接种针——用于穿刺接种； 接种环——用于斜面接种或平板划线接种； 玻璃涂布器——用于涂布平板接种； （4）接种和分离 4.酵母菌的纯培养 一 微生物的基本培育技术 接种的方法：涂布平板法、穿刺接种法、斜面接种法、平板划线法 （4）接种和分离 4.酵母菌的纯培养 一 微生物的基本培育技术 平板划线法：通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养，可以分离得到单菌落。 单个细胞 微生物群 单个菌落 连续划线 稀释分散 生长繁殖 （4）接种和分离 4.酵母菌的纯培养 一 微生物的基本培育技术 连续划线法 分区划线法 （4）接种和分离 配制培养基 灭菌 倒平板 接种和分离 ①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。 ②在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌培养液的试管的棉塞 ③将试管口通过火焰 ④将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液 ⑤将试管口通过火焰，并塞上棉塞 ⑥在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基 ⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复