1.2 微生物的培养技术与应用（第4课时）（上课用课件）-2022-2023学年高二生物同步精品课堂（人教版2019选择性必修3）

1.2 微生物的培养技术及应用（第4课时） 教学目标 1.概述培养基的营养构成和种类 2.概述无菌技术的原理和方法，掌握无菌操作 3.通过配制培养酵母菌的马铃薯蔗糖培养基，初步掌握配制培养基的基本技能 4.概述分离和纯化微生物的平板划线法和稀释涂布平板法 5.概述测定微生物数量的稀释涂布平板法和显微镜计数法 探究•实践 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 1.提出问题 (1)土壤中含有能分解尿素的细菌，我们如何分离它们？ (2)每克土壤样品究竟含有多少这样的细菌？ 利用以尿素作为唯一碳源的选择培养基，可以分离。 自变量：________________________ 因变量：__________________________ 无关变量：______________________________ 尿素 能分解尿素细菌的生长情况 培养时间、培养基的pH、温度等 2.做出假设 3.实验设计 实验思路 预测实验 土壤 取样 制备 培养基 样品稀释 与取样涂布 微生物的 培养与观察 探究•实践 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 【实验目的】 1.土壤中含有能分解尿素的细菌，我们如何和分离它们？ 2.每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌？ 常见的分解尿素的微生物：芽孢杆菌、小球菌、棒状杆菌等细菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。 探究•实践 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 探究.实践 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 【实验原理】 绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌，该选择培养基的配方如下。 组分 含量 KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4∙7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g H2O 定容至1000mL ①提供无机盐； ②调节pH。 提供碳源 提供氮源 提供水 可判断为固体培养基 6 【实验设计流程】 土壤取样 ①要求：富含有机质、酸碱度接近中性且潮湿的土壤 ②取样土层：距地表3~8cm的土壤层 制备培养基 以尿素为唯一氮源（选择培养基） 样品的稀释 在酒精灯火焰旁称取土壤10g，放入90mL无菌水的锥形瓶中，震荡使土壤与水充分混合，将细菌分散，制成101倍土壤稀释液。用1支1mL无菌吸管从中吸取1mL土壤悬液注入盛有9mL无菌水的试管中，吸取三次，充分混匀，制成102倍的土壤稀释液。以此类推，制成103、104、105、106、107倍的土壤稀释液。 探究•实践 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 不同微生物在土壤中含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30～300之间，适于计数的平板。 测细菌数：一般用104、105、106稀释液 测放线菌：一般用103、104、105稀释液 测真菌数：一般用102、103、104稀释液 注意：样品的稀释与稀释涂布平板法接种 探究.实践 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 涂布平板 培养与观察 图中的1、2、3平板是选择培养基，4平板为牛肉膏蛋白胨培养基，以判断选择培养基是否具有筛选作用；另外，还要有两个对照，即不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基以验证培养基中是否含有杂菌。 1 2 3 4 将平板倒置于30~37℃的恒温培养箱中培养1~2天。每隔24小时统计一次菌落数目 【实验设计流程】 探究•实践 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 菌落计数 当菌落数目稳定时，选取菌落数在30~300的平板进行计数，同一稀释度下至少计数3个平板，求出平均值，并根据所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。设计如下表格记录并计数。 稀释度 104 105 106 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 每个平板的菌落数 【实验设计流程】 探究•实践 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 菌落计数 当菌落数目稳定时，选取菌落数在30~300的平板进行计数，同一稀释度下至少计数3个平板，求出平均值，并根据所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。设计如下表格记录并计数。 稀释度 菌落形状 菌落大小 菌落颜色 平均值 104 105 106 【实验设计流程】 探究•实践 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 【结果分析与评价】 内容 现象 结论 有无杂菌污染的判断 空白对照的培养基中无菌落生长 培养基中菌落数偏高 菌落形态多样，菌落数偏高 选择培养基的筛选作用 牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目多于选择培养基上的数目 样品的稀释操作 得到2个或2个以上菌落数目在30~300的平板 重复组的结果 未被杂菌污染 被杂菌污染 混入其他氮源