2023届高三生物一轮复习课件：基因工程

勇于开始， 才能找到成功的路 1.限制酶来源?在原核生物中的作用是什么？不破坏自身DNA的原因是什么？作用特点？结果？ 2.同尾酶概念？同尾酶切割后产生的黏性末端为何能够连接？同尾酶切割后产生的黏性末端通过DNA连接酶连接后，该序列还能再被原来的酶识别和切割吗？ 3.用同一种限制酶切割后，会出现哪些连接情况？用两种限制酶切割后，会出现哪些连接情况？用不同的限制酶切割的目的？ 4.基因表达载体的构建时选择限制酶的原则 1 1.DNA连接酶的作用？类型及特点？ 2.载体的种类？各自的用途？作为载体必备的条件？质粒的概念？ 3.DNA的粗提取与鉴定实验原理？过滤的方法？过滤后取上清液还是取沉淀物？析出的操作步骤？ 2 1.基因工程的基本操作程序？基因工程操作环境？ 操作水平？ 原理？ 2.目的基因的筛选与获取方法？ 3.逆转录法的过程？ 4.基因组文库与cDNA文库的区别（ 3 1.PCR原理？条件？缓冲溶液中添加Mg2+的作用？过程？鉴定PCR产物的方法？用PCR可以扩增mRNA吗？ 2.引物的作用？要求？为何需要2种引物？扩增n次需要多少个引物？ 4 当真核生物的基因以原核生物作为受体细胞时： 1.若无法获得该蛋白，原因可能是什么？ 2.以上情况如何解决？ 3.若可以获得该蛋白，但是蛋白质无活性，原因可能是？ 4.以上情况如何解决？ 5.若原核生物由mRNA逆转录形成的cDNA与原基因的结构相比有哪些不同？ 6.若真核生物由mRNA逆转录形成的cDNA与原基因的结构相比有哪些不同？ 5 1.基因表达载体的构建目的？ 2.基因表达载体组成？ 3.基因表达载体各组成部分的作用？ 4.转化的概念？ 5.将目的基因导入受体细胞的方法及适用范围？ 6 1.在培养有些转基因植物时，常用农杆菌转化法，农杆菌的作用是什么？ 2.原理？ 3.采用农杆菌转化法导入目的基因时，为什么目的基因可以整合到染色体的DNA上? 4.目的基因插入染色体DNA上的目的是什么？ 5.两次拼接、两次导入 6.转基因的植物细胞如何获得最终的新品种？ 7 1、检测与鉴定目的基因的目的： 2、检测与鉴定的方法： 3、PCR技术检测基本原理？ 4、核酸分子杂交技术原理？ 8 1.乳腺生物反应器制备流程？ 2.为什么将药用蛋白基因与乳腺中特异表达的基因的启动子等调控元件重组在一起？ 3.药用蛋白基因存在于转基因动物的哪些细胞中？ 4.生物反应器除了用乳腺，还可以用什么器官？ 5.膀胱生物反应器哪些方面优于乳腺生物反应器？ 6.研制膀胱生物反应器时，应如何处理目的基因**？ 7.用生物反应器生产药物的优点？ 8.转基因技术中会形成新物种吗？ 9.乳腺生物反应器经过有性生殖产生的后代一定可以产生目标蛋白吗？ 9 1.乳腺（房）生物反应器与基因工程菌生产药物 2.为什么可以用猪的器官解决人类器官移植的来源问题？ 3. 利用转基因技术对猪的器官进行改造，培育不会引起免疫排斥反应的转基因克隆猪器官，采用什么方法？ 4.相比从天然产物中提取的酶，构建基因工程菌，然后用发酵技术生产酶，优势？ 10 1.工程菌概念 2.用大肠杆菌生产人胰岛素的流程： 3.目前除了可以利用大肠杆菌生产人胰岛素，还可以用酵母菌来生产人胰岛素，请从细胞的结构与功能相适应的角度考虑，二者生产的人胰岛素有何不同？ 4.蛋白质工程概念？地位？崛起的缘由/ 11 基因工程是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物制品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫重组DNA技术。 一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀” 1.简称： 限制酶 2.来源： 主要是从原核生物中分离纯化出来的。 3.作用： 识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。 4.作用部位： 特定部位的磷酸二酯键 A T C G T A G C 5’ 3’ 5’ 3’ 磷酸二酯键 5.识别序列： 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，也有少数限制酶的识别序列由4个、8个或其他数量的核苷酸组成。 EcoRⅠ 5’…G-A-A-T-T-C…3’ 3’…C-T-T-A-A-G…5’ SmaⅠ 5’…C-C-C-G-G-G…3’ 3’…G-G-G-C-C-C…5’ 具有专一性 6.切割结果：切口有两种：黏性末端和平末端 ①无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的 ，这就是回文序列。 ②能被限制酶特异性识别的切割部位基本都具有回文序列：在切割部位，一条链正向读的碱基顺序与另一条链反向读的顺序完全一致