3.2 基因工程的操作程序（第3课时）-【轻松学生物】2022-2023学年高二生物同步教学精优课件（人教版2019选择必修3）

基因工程的 基本操作程序 （第三课时） ——基因工程的核心 1.目的 （1）使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代 （2）使目的基因能够表达和发挥作用 阅读P80第二段内容，思考基因表达载体由哪些部分组成？试结合P72图3—4质粒的结构画出基因表达载体模式图，标注各组成部分的名称。 第二步：基因表达载体的构建 单击此处编辑母版文本样式 第二级 第三级 第四级 第五级 2.基因表达载体组成及其功能 注意：目的基因必须插入到________与________之间。 终止子 RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA。 DNA复制的起始位点 便于重组DNA分子的筛选 控制特定性状或表达特定产物 终止目的 基因的转录 启动子 3.基因表达载体构建的流程 ①用一定的限制酶切割载体，使其出现一个切口，露出黏性末端。 ②用同种限制酶或能产生相同末端的限制酶切割含有目的基因的DNA片段。 ③利用DNA连接酶将目的基因片段拼接到载体的切口处，形成重组DNA分子 目的基因与运载体的结合 过程，实际上是不同来源的基因重组的过程 单击此处编辑母版文本样式 第二级 第三级 第四级 第五级 转化是指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 不同生物的导入方法各不同 转化的实质是将目的基因整合到受体细胞基因组中 第三步：将目的基因导入受体细胞 1.花粉管通道法 ①用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中； ②在植物授粉后一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴在花柱切面，使目的基因通过花粉管通道进入胚囊。 6 农杆菌特点： 易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力。 Ti质粒上的T-DNA可以转移到被侵染的受体细胞，并将其整合到该细胞染色体的DNA上。 2.农杆菌转化法 原理： 结合视频资料，对照P81图解思考农杆菌转化过程步骤，可分哪几个阶段？ 农杆菌转化过程： ________插入Ti质粒的_______中形成含目的基因的重组Ti质粒 将含目的基因的重组Ti质粒导入_________ 农杆菌 目的基因 T-DNA ①构建表达载体 ②转入农杆菌 8 目的基因插入植物细胞中的__________上 染色体DNA  ③导入植物细胞  ④表现出新性状的植株 愈伤组织 幼苗 新性状植株 含目的基因 的植物细胞 脱 分化 再分化 移栽 目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA上； 被插入目的基因的T-DNA拼接到受体细胞染色体的DNA上。 将含目的基因的重组Ti质粒导入农杆菌 含目的基因的T-DNA导入受体细胞 注意过程中的“两拼接”“两导入”的指代 两次拼接 两次导入 3.将目的基因导入动物细胞——显微注射法 受精卵 构建基因表达载体 早期胚胎培养 获得具新性状的转基因动物 显微注射 胚胎 移植 4.将目的基因导入微生物细胞 一般先用Ca2+处理大肠杆菌,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,后再将重组的基因表达载体导入其中 检测转基因生物染色体DNA上是否插入目的基因 检测目的的基因是否转录出了mRNA 检测目的基因是否翻译成蛋白质 分子检测 抗虫鉴定 抗病鉴定 活性鉴定 个体生物学水平的鉴定 DNA分子水平 RNA分子水平 蛋白质分子水平 PCR核酸杂交检测 抗虫接种实验 抗原-抗体杂交 第四步：目的基因的检测与鉴定 核酸杂交检测法 原理： 碱基互补配对原则 过程： ③使探针和转基因生物的DNA （或mRNA）杂交,若显示出杂交带,表明目的基因已插入染色体DNA中（或目的基因转录出了mRNA） ①提取转基因生物的DNA ②制作基因探针： 用含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记。 抗原-抗体杂交 从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原-抗体杂交，若 有杂交带出现，表明目的 基因已形成蛋白质产品。 抗虫、抗病或活性鉴定 通过抗虫或抗病的接种实验。有的基因工程产品需要与天然产品的功能进行活性比较。 获取质粒 噬菌体等载体 筛选和获取目的基因 用限制酶切 割载体和含有目的基因的DNA片段，然后用DNA连接酶连接，构建基因表达载体 将含有目 的基因的表达载体导入受体细胞 检测和鉴 定目的基因 是否稳定维 持和表达其 遗传特性 基因工程 的基本操 作程序 1.下列关于基因的叙述中正确的是 A.基因在DNA双链上成对存在 B.基因中含有遗传密码 C.基因位于DNA分子上 D.基因由四个脱氧核糖核苷酸分子组成 C 2.有关基因工程的叙述正确的是 A.限制酶只在获得目的基因时才用 B.重组质粒的形成在细胞内完成 C.质粒都可作为运载体 D.蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 D 3、以下说法正确的是 A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷