3.1 重组DNA技术的基本工具（第2课时）-【轻松学生物】2022-2023学年高二生物同步教学精优课件（人教版2019选择必修3）

（第二课时） 若把两种异源DNA用同种限制酶来切割，会怎样？ 会产生相同的黏性末端，可以进行碱基互补配对。 C G G C C G T A T A A T A T G C G C G C T A A T C G T A T A A T A T G C T A T A EcoRI EcoRI C G G C C G T T A A A A T T G C G C G C T A A T C G T T A A A A T T G C T A T A C G G C C G T T A A A A T T G C T A T A 何酶能把这两缺口连接起来？ DNA连接酶──“分子缝合针”、“基因的针线” 将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。使之成为一个完整 的DNA分子。 作用： 作用部位： 磷酸二酯键 单击此处编辑母版文本样式 第二级 第三级 第四级 第五级 注意： DNA连接酶是把缺口的磷酸二脂键连接，而不是氢键（氢键的形成不需酶的催化） 类型 E.coliDNA连接酶 T4 DNA连接酶 来源 功能 只缝合_________ 缝合________和_____ 结果 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的_________________ 大肠杆菌 T4噬菌体 黏性末端 黏性末端 平末端 磷酸二酯键 连接酶的种类： DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 两者都能催化形成磷酸二酯键 DNA聚合酶是在DNA复制过程中以DNA的一条链作模板，只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键而形成DNA的一条子链 DNA连接酶是在基因工程中将两个DNA片段之间形成磷酸二酯键而形构成重组DNA分子 DNA的连接酶、限制酶、聚合酶、解旋酶、水解酶 项目 作用部位 作用对象 作用结果 连接酶 限制酶 聚合酶 解旋酶 水解酶 磷酸 二酯键 磷酸 二酯键 磷酸 二酯键 磷酸 二酯键 氢键 DNA片段 DNA 单个的脱氧核苷酸 DNA DNA 将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸 将两个DNA片段连接成完整DNA分子 切割双链DNA分子 将单个脱氧核苷酸连到DNA单链末端 将双链DNA分子局部解旋为单链 单击此处编辑母版文本样式 第二级 第三级 第四级 第五级 1：要让一个从甲生物细胞内取出来的外源基因怎样才能导入在乙生物体内(受体细胞)进行表达? 能将外源基因送入细胞的工具就是运载体 2：作为运载体，你认为该有的作用有哪些？ 作为运载工具，将外源基因(抗虫基因)转移到受体细胞(棉花细胞)中去。 利用运载体在受体细胞(棉花细胞)内，对外源基因(抗虫基因)进行大量复制。 基因进入受体细胞的载体——分子运输车 将目的基因转入受体细胞，在受体细胞内对目的基因进行大量复制。 作用： 通常是用质粒、噬菌体、动植物病毒等可作载体 种类： 病毒 单击此处编辑母版文本样式 第二级 第三级 第四级 第五级 载体——质粒 质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有自我复制能力的环状双链DNA分子。 真正用作载体的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的！ 质粒都可用作载体吗？ 运载体需具备的条件 ①在受体细胞中稳定存在并能自我复制或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制； ②有一个至多个限制酶切割位点，便于插入（携带）目的基因； ③具有标记基因，便于筛选含有重组DNA分子的细胞； ④对受体细胞无害、易分离 思考讨论——重组DNA分子 请你根据图中的相关信息找到两条片段上EcoRI的识别序列和切割位点。然后，用剪刀进行“切割”。待切割位点全部切开后，将从下面那条DNA链上切下的片段重组到上面那条DNA链的切口处，并用透明胶条将切口粘连起来。 1.剪刀和透明胶条分别代表哪种“分子工具”？ 剪刀代表限制酶；透明胶条代表DNA连接酶 2.你制作的黏性末端的碱基能不能互补配对？如果不能，可能是什么原因造成的？ 若制作的黏性末端的碱基不能互补配对可能是剪切位点或连接位点选得 不对，也可能是其他原因。 3.你插入的DNA片段能称得上一个基因吗？ 不能，因为基因的长度一般在100个碱基对以上 1.限制酶和DNA连接酶是基因工程的工具酶，以下说法正确的是 ( 　) A.DNA连接酶连接的是两条链碱基对之间的氢键 B.限制酶只能切割双链DNA片段，不能切割烟草花叶病毒的核酸 C.E.coli DNA连接酶既能连接黏性末端，也能连接平末端 D.限制酶主要从原核生物中分离纯化而来，所以也能剪切自身的DNA B 2.下列关于质粒的叙述，正确的是（ ） A.质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器 B.质粒是细菌细胞质